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幹細胞の未分化状態を維持する分子機構解明の試み

试图阐明维持干细胞未分化状态的分子机制

基本信息

批准号：
08877048
负责人：
仲野徹
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス胚性幹細胞は哺乳類において、自己複製能と分化における全能性が実験的に確認されている唯一の細胞株である。また、始原生殖細胞はその分化過程の初期においては分化の全能性を有しているが、生殖巣に侵入するころから全能性を喪失することが知られている。すなわち、全能性の幹細胞から、生殖細胞の幹細胞に分化するわけである。これら二つの細胞、胚性幹細胞と生殖細胞における遺伝子発現の異同を解析することにより、両者で特異的に高発現している遺伝子、あるいは、一方のみで高発現している遺伝子、を知ることができる。この考えのもとに、SAGE(Serial analysis of gene expression)法を用いて、両者の遺伝子発現プロファイルを解析することを計画した。この目的のためには、始原生殖細胞を比較的高純度で集める必要がある。そこで、始原生殖細胞に特異的に発現する遺伝子である、組織非特異的アルカリフォスファターゼ(TNAP)遺伝子座にLacZ遺伝子をノックインした遺伝子組み換えマウス(TNAPβgeo)を用いて、始原生殖細胞の単離を行った。この方法は、従来の方法に比べて効率よく始原生殖細胞を単離できるものであるが、胎生12.5日胚を用いた場合においても、一回の操作で約10、000個の始原生殖細胞しか単離することができない。現在、ほぼSAGE法によるスクリーニングに必要な量のRNAを単離することができた状態にある。

It is the only cell line that has been confirmed to be mammal embryonic stem cells and has the ability to self-replicate and differentiate and is totipotent. The initial stage of differentiation process of primordial germ cells and the totipotency of primordial germ cellsいるが, reproductive uterus invades するころから omnipotence をloss することがknow られている.すなわち, totipotent stem cell から, germ cell のstem cell にdifferentiation するわけである. Analyze the differences and similarities between embryonic stem cells and germ cells The special に高発appears している伝子、あるいは、一平のみで高発appears している伝子、を知ることができる.この考えのもとに, SAGE (Serial analysis of gene expression) method いて, 両者の伝子発 appear プロファイルをanalytic することをplan した. It is necessary to collect high-purity primordial germ cells in order to achieve the purpose.そこで, primordial germ cell specific に発成する伝子である, tissue non-specific アルカリフォスファターゼ(TNAP) 伝子杼にLacZ缝子をノックインした缝子组みchangeえマウス(TNAPβgeo)を用いて, primordial germ cell の単里を行った.この法は, 従来の法に比べてefficiency よくprimordial germ cell を単出できるものであるが, viviparous 12.5 day embryo It can be used in various occasions, and it can be used to remove approximately 10,000 primordial germ cells in one operation. Now, the SAGE method is the necessary amount of RNA and the state of the SAGE method.