幹細胞の未分化状態を維持する分子機構解明の試み

试图阐明维持干细胞未分化状态的分子机制

• 批准号: 08877048
• 负责人: 仲野 徹
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877048/
• 关键词: 胚性幹細胞; 幹細胞; 始原生殖細胞; 細胞分化; 遺伝子クローニング; 造血幹細胞; マウス; 転写因子

マウス胚性幹細胞は哺乳類において、自己複製能と分化における全能性が実験的に確認されている唯一の細胞株である。また、始原生殖細胞はその分化過程の初期においては分化の全能性を有しているが、生殖巣に侵入するころから全能性を喪失することが知られている。すなわち、全能性の幹細胞から、生殖細胞の幹細胞に分化するわけである。これら二つの細胞、胚性幹細胞と生殖細胞における遺伝子発現の異同を解析することにより、両者で特異的に高発現している遺伝子、あるいは、一方のみで高発現している遺伝子、を知ることができる。この考えのもとに、SAGE(Serial analysis of gene expression)法を用いて、両者の遺伝子発現プロファイルを解析することを計画した。この目的のためには、始原生殖細胞を比較的高純度で集める必要がある。そこで、始原生殖細胞に特異的に発現する遺伝子である、組織非特異的アルカリフォスファターゼ(TNAP)遺伝子座にLacZ遺伝子をノックインした遺伝子組み換えマウス(TNAPβgeo)を用いて、始原生殖細胞の単離を行った。この方法は、従来の方法に比べて効率よく始原生殖細胞を単離できるものであるが、胎生12.5日胚を用いた場合においても、一回の操作で約10、000個の始原生殖細胞しか単離することができない。現在、ほぼSAGE法によるスクリーニングに必要な量のRNAを単離することができた状態にある。

マ ウ ス embryonic stem cells は mammals に お い て, oneself can replicate と differentiation に お け る totipotency が be 験 に confirm さ れ て い る only の cell lines で あ る. ま た beginning, primordial germ cells は そ の differentiation の early に お い て は differentiation の totipotency を have し て い る が, reproductive 巣 に intrusion す る こ ろ か ら totipotency を loss す る こ と が know ら れ て い る. Youdaoplaceholder0, totipotent <s:1> stem cells ら, germ cell <s:1> stem cells に differentiation するわけである. こ れ ら two つ の cells, embryonic stem cells と reproductive に お け る posthumous son 伝 発 is の similarities and differences between analytical す を る こ と に よ り, struck で high specific に 発 now し て い る heritage 伝, あ る い は, one party の み で high 発 now し て い る heritage 伝, を know る こ と が で き る. こ の exam え の も と に, SAGE (Serial analysis of gene expression) method を with い て, struck の heritage 伝 son 発 now プ ロ フ ァ イ ル を parsing す る こ と を project し た. The objective of <s:1> is to obtain a high-purity で set める necessary がある for the comparison of ために and を of primordial germ cells. そ こ で beginning, primordial germ cells に specific に 発 now す る posthumous son 伝 で あ る, organization of nonspecific ア ル カ リ フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ (TNAP) heritage 伝 stroma に LacZ posthumous son 伝 を ノ ッ ク イ ン し た heritage 伝 subgroups み in え マ ウ ス TNAP beta (geo) を with い て, primordial germ cells in the beginning の 単 line from を っ た. こ の way は, 従 の way に than べ て sharper rate よ く primordial germ cells in the beginning を 単 from で き る も の で あ る が, viviparous 12.5 day embryo を い た occasions に お い て も, once の で operation about 10, 000 の beginning primordial germ cells し か 単 from す る こ と が で き な い. Now, ほ ぼ SAGE method に よ る ス ク リ ー ニ ン グ に necessary な amount の RNA を 単 from す る こ と が で き た state に あ る.

项目成果

K.Tashiro,T.Nakano,T.Honjo: "Signal sequence trap:expression cloning methods for secreted proteins and type 1 transmembrane proteins" Methods in Molecular Biology. 69. 203-219 (1996)

K.Tashiro、T.Nakano、T.Honjo：“信号序列陷阱：分泌蛋白和 1 型跨膜蛋白的表达克隆方法”分子生物学方法。

T.Yamane, T.Nakano, et al: "Development of osteoclasts from embryonic stem cells through a pathway that is c-Fms,but not c-Kit dependent." Blood. 90. 3516-3573 (1997)

T.Yamane、T.Nakano 等人：“通过 c-Fms 而非 c-Kit 依赖性途径从胚胎干细胞发育破骨细胞。”

T.Aoki, T.Nakano, et al: "Induction of Bip mRNA upon programmed cell death of differentlated PC12 cellls as well as rat sympathetic neurons." J Biochem. 121. 122-127 (1997)

T.Aoki、T.Nakano 等人：“分化的 PC12 细胞以及大鼠交感神经元程序性细胞死亡时 Bip mRNA 的诱导”。

T.Aoki, T.Nakano, et al: "Rat TAFll31 gene is induced upon programmed cell death in differentiated PC12 cells deprived of NGF." BBRC. 234. 230-234 (1997)

T.Aoki、T.Nakano 等人：“在缺乏 NGF 的分化 PC12 细胞中，大鼠 TAFll31 基因在程序性细胞死亡时被诱导。”

J.L.de la Pompa, T.Nakano, et al: "Conservation of the Notch signalling pathway in mammalian neurogenesis." Development. 124. 1139-1148 (1997)

J.L.de la Pompa、T.Nakano 等人：“哺乳动物神经发生中 Notch 信号通路的保守”。