胚性幹細胞の分化を制御するレセプター遺伝子の同定と機能の解析

控制胚胎干细胞分化的受体基因的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
09876081
负责人：
国枝哲夫
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09876081/
关键词：
ES細胞レセプター細胞分化チロシンキナーゼ TGFβ PCR

项目摘要

ES細胞を用いた遺伝子欠損マウスの作製は、遺伝子の機能を解析する上で有効な方法であり、家畜においても特定の遺伝形質を導入する上でES細胞の利用は有効な方法と期待されているが、残念ながら現時点ではマウス以外の動物のES細胞は未だに樹立されていない。ES細胞の樹立に必要とされる細胞の未分化な状態の維持に影響を与える要因の一つに、細胞膜上のレセプターとリガンドを介した細胞間相互作用が考えられる。そこで本研究は、ES細胞において発現しているレセプターの遺伝子を同定し、ES細胞に分化に関与するリガンドとレセプターの相互作用を解明することを目的とした。ES細胞の分化における細胞間相互作用には多数の分子が関与すると考えられるが、特に細胞膜上のレセプターに関しては、2つの遺伝子ファミリーに属するレセプター、すなわちチロシンキナーゼ型レセプターおよびTGFβレセプター遺伝子ファミリーが、重要な役割を果たしていると考えられる。これらのファミリーに属する分子は、アミノ酸配列上相同性の極めて高い領域が存在することから、本研究ではこの領域に基づいてES細胞に発現するレセプター分子を同定することを試みた。マウスES細胞をフィダ-細胞を除去した条件で培養し、RNAを抽出した。各ファミリーのレセプターのアミノ酸配列上相同性の高い領域について、縮重型のプライマーを作製し、マウスES細胞由来のRNAを用いてRT-PCR法による増幅を行い、得られたPCR産物をクローニングしその塩基配列を決定した。その結果、いくつかのクローンが得られたが、いずれのクローンも既知のものと同一であり、新規の配列は得られなかった。現在、プライマーの配列を変更し、再度クローニングを試みている。

使用ES细胞的遗传缺乏小鼠是一种分析基因功能的有效方法，预计ES细胞的使用是一种有效的方法，用于在牲畜中引入特定的遗传特征，但不幸的是，目前尚未确定来自小鼠以外的动物的ES细胞。影响细胞在ES细胞建立所需的细胞未分化状态的一个因素是通过细胞膜上的受体和配体进行细胞 - 细胞相互作用。因此，这项研究旨在鉴定在ES细胞中表达的受体基因，并阐明配体与分化为ES细胞的受体之间的相互作用。尽管人们认为许多分子在ES细胞分化中涉及细胞细胞相互作用，特别是在细胞膜上的受体，属于两个基因家族的受体，即酪氨酸激酶型受体和TGFβ受体基因家族，被认为起着重要作用。由于属于这些家族的分子在氨基酸序列上具有极高的同源性，因此在这项研究中，我们试图根据该区域鉴定在ES细胞中表达的受体分子。在去除FIDA细胞并提取RNA的条件下培养小鼠ES细胞。为在每个家族的受体的氨基酸序列上具有高同源性的区域制备退化引物，并使用RT-PCR衍生自小鼠ES细胞的RNA进行扩增，并将所得的PCR产物克隆起来以确定碱基序列。结果产生了几个克隆，但两种克隆都与已知的序列相同，没有获得新的序列。当前，引物序列已更改，并尝试再次克隆。