IL−6−，サイトカイン−，bcl−2−遺伝子欠損・導入によるキラーT生存機構

通过 IL-6、细胞因子和 bcl-2 基因删除/引入实现杀伤性 T 存活机制

• 批准号: 09670337
• 负责人: 岡田 全司
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09670337/
• 关键词: bcl-2遺伝子; IL-6遺伝子; キラーT細胞; T細胞長期生存; T細胞分化; 遺伝子導入マウス; 遺伝子ノックアウトマウス; adoptive transfer

1.(IL-6遺伝子+bcl-2遺伝子)ダブルノックアウトマウスの作製;IL-6遺伝子ノックアウトマウスとbcl-2遺伝子ノックアウトマウスを交配しダブルノックアウトマウスの作製を試みた。両遺伝子欠損マウスにおいては脾臓は正常の約1/20の大きさでin vitroのキラーT分化誘導は著明に抑制された。2.(IL-6遺伝子+bcl-2遺伝子)導入マウスを用いた解析;このマウスの胸線細胞、碑及びリンパ節細胞を同系癌FBL-3や同種異系癌p815でin vitro刺激すると、胸線細胞の生存数及び^3H-サイミジン取り込みはIL-6遺伝子導入マウスやbcl-2遺伝子導入マウスの胸線細胞に比し50〜100倍の相乗効果が認めらた。キラーT細胞誘導活性においても約200倍の活性が示された。さらに、長期培養の28日MLTCにおいても(IL-6+bcl-2)double TgマウスT細胞のみがキラー括性を保持し、また、相乗的な長期生存率上昇を示した。さらに、in vivoにおいても、(IL-6+bcl-2)double Tgマウスは免疫2ヵ月後(通常マウスではキラー活性消失)の脾・リンパ節・PEC中に抗原特異的なCD8^+キラーT活性が維持された。このリンパ球をadoptive transferし、2ヵ月後のリンパ球生存を解析した。その結果、両遺伝子が強制発現されたリンパ球において最もキラー活性を保持したまま長期生存することを明らかにした。3.bcl-2遺伝子導入マウス+IL-6遺伝子+IL-6R遺伝子+gp130遺伝子導入の解析;bcl-2遺伝子導入マウスにこれらのIL-6関連遺伝子をアデノウイルスベクターを用いて導入すると極めて強力な生体内キラーT分化誘導の相乗効果が認められた。4.(IL-7遺伝子+IL-6遺伝子)導入マウス及び(IFN-β遺伝子+IL-6遺伝子)導入マウスを用いた解析;これらのダブルtransgenicマウスではキラーTの長期生存が認められた。

1. (IL-6 The IL-6 gene was tested for its ability to mate with the bcl-2 gene, and the IL-6 gene was tested for its ability to mate with the bcl-2 gene. In vitro differentiation induction is inhibited by a factor of about 1/20 of normal. 2. (IL-6 The expression of bcl-2 gene in IL-6 gene was analyzed by PCR. The results showed that the expression of bcl-2 gene in IL-6 gene was 50 ~ 100 times higher than that in FBL-3 and p815. T cell induction activity is about 200 fold higher than that of the control group. In addition, the long-term survival rate of MLTC (IL-6+bcl-2)double Tg was increased after 28 days of long-term culture. In vivo,(IL-6+bcl-2)double Tg is maintained 2 months after immunization (usually when the activity disappears) and antigen-specific CD8^+ T activity is maintained in PEC. This is an adoptive transfer, 2 months later, this is an analysis. As a result, the virus is found to be most active in the brain and remains active for a long time. 3. Analysis of bcl-2 gene introduction +IL-6 gene +IL-6R gene + gp130 gene introduction;bcl-2 gene introduction + IL-6 gene + gp130 gene introduction;bcl-2 gene introduction + IL-6 gene + gp130 gene introduction; bcl-2 gene introduction + IL-6 gene + gp130 gene introduction + gp13 4. (IL-7 Gene +IL-6 gene) was introduced into Mausu and Tai (IFN-β gene +IL-6 gene) was introduced into Mausu to be analyzed with Ita; thisのルtransgenic Mausu

项目成果

岡田 全司: "ヒト腫瘍のモデル(SCID-PBL/hu疾患モデル)“SCID・疾患モデル研究"" 日本医学館, 14(148) (1997)

Kenji Okada：“人体肿瘤模型（SCID-PBL/hu疾病模型）“SCID/疾病模型研究””日本医学博物馆，14（148）（1997）

Tanaka F: "The anti-human tumor effect and generation of human cytotoxic T cells in SCID^T・PBL/hu mice by the in vivo transfer of the IL-6 gene using adenovirus vector" Cancer Research. 57. 1335-1343 (1997)

Tanaka F：“通过使用腺病毒载体体内转移 IL-6 基因，在 SCID^T·PBL/hu 小鼠中产生抗人类肿瘤作用和人类细胞毒性 T 细胞”，Cancer Research 57. 1335-1343（ 1997）

岡田 全司: "IL-6遺伝子を用いた遺伝子治療" 血液 腫瘍科. 34. 353-363 (1997)

Kenji Okada：“使用 IL-6 基因的基因治疗”血液学和肿瘤学系 34. 353-363 (1997)。

Maeda T: "Two sisters with Ehlers-Danlos syndrome and congenital heart anomalies" Internal Medicine. 35. 200-202 (1997)

Maeda T：“患有埃勒斯-当洛斯综合征和先天性心脏异常的两姐妹”内科。

岡田 全司: "ヒト腫瘍のモデル総論“SCID・疾患モデル研究"" 日本医学館, 15(148) (1997)

Kenji Okada：“人类肿瘤模型概述“SCID/疾病模型研究””日本医学博物馆，15（148）（1997）