Identifizierung und Charakterisierung der Arg-100-Transferrinrezeptor-Sheddingprotease

转铁受体（TfR） vermittelt， ber binding and Internalisierung des Eisenaufnahme在die Zelle转运蛋白。Die extrazelluläre Domäne des humanen membranständigen TfR kann durch protein olytische Spaltung Cterminal von Arg-100 in Serum freigesetzt werden， wo sie也660 Aminosäuren großer Serum-TfR vorkommt。[3] [3] [3] [3] [3] [4] [4] [4] [4] [4] [4] [4] [4] [4] [4] [4] [4]细胞脱落的催化酶蛋白酶是一种较弱的蛋白酶。Ziel等人对tfr -脱落蛋白酶的鉴定、原基因、克隆和功能细胞的特性进行了研究。Zunächst soll die Protease mit verschidenen Methoden der Affinitätschromatographie ber固定化，可逆结合抑制基因和n端序列的研究。德国免疫学报Mäusen单克隆抗体Antikörper。利用Verwendung degenerierter引物soll - die cDNA der Protease mittels RT-PCR， EST-Datenbankvergleich sowie 3‘和5’- race进行鉴定。dna -杂交技术（DNA-Hybridisierung）和cDNA- banken分离技术（cDNA- banken isoliert）均可替代。死Funktionen der蛋白酶,您监管和您Lokalisation sollen anschließim Zellkulturmodell结束和一个Gewebeschnitten umfassend analysiert了。

Der Transferrinrezeptor (TfR) vermittelt über Bindung und Internalisierung des Eisentransportproteins Transferrin die Eisenaufnahme in die Zelle. Die extrazelluläre Domäne des humanen membranständigen TfR kann durch proteolytische Spaltung Cterminal von Arg-100 ins Serum freigesetzt werden, wo sie als 660 Aminosäuren großer Serum-TfR vorkommt. Es wird vermutet, daß der Sheddingprozeß eine wesentliche Rolle für die Regulation der Zahl der TfR-Moleküle an der Zelloberfläche spielt. Die das Shedding katalysierende Protease ist bisher jedoch nicht bekannt. Ziel ist es, die TfR-Shedding-Protease zu identifizieren, zu reinigen, zu klonieren und funktionell zu charakterisieren. Zunächst soll die Protease mit verschiedenen Methoden wie der Affinitätschromatographie über immobilisierte, reversibel bindende Inhibitoren gereinigt und N-terminal sequenziert werden. Durch die Immunisierung von Mäusen sollen monoklonale Antikörper gewonnen werden. Unter Verwendung degenerierter Primer soll die cDNA der Protease mittels RT-PCR, EST-Datenbankvergleich sowie 3'- und 5'-RACE identifiziert werden. Alternativ soll die cDNA durch DNA-Hybridisierung oder Expressionsklonierung aus cDNA-Banken isoliert werden. Die Funktionen der Protease, ihre Regulation und ihre Lokalisation sollen anschließend im Zellkulturmodell und an Gewebeschnitten umfassend analysiert werden.