Biochemische Charakterisierung der Interaktion zwischen Reverser Transkriptase (P-Protein) und RNA-Verpackungssignal aviärer Hepatitis-B-Viren

乙肝病毒复制<s:1>逆转录eines RNA- intermediates， der prägenomischen RNA。逆转录酶（RT）， P-Protein，转录酶（RT），转录酶e-RNA元件，转录酶e-RNA元件，转录酶e-RNA元件。Die Aufklärung dieses ungewöhnlichen Mechanismus ist das langfristige Ziel des Projektes。Neben P-Protein和enthält der initiationskcomplexes Chaperone， essential Komponenten和kann nur的体外翻译研究：乙型肝炎病毒（DHBV）的P-Protein重组研究。生物物理学报Strukturaufklärung ist daher z.Zt。不moglich。Unser stattdessen biochemistry orientiter . Ansatz, gezeigt, dasß die komplexbildingeine drastische RNA-Strukturänderung industriiert and frdie Interaktion mit Protein wichtige structure -, Basen- and Rückgrat-abhängige rna - teilelement definient。Drei komplementäre Ansätze sollen nun verstärkt die Rolle des P-Proteins特性：die Kartierung der Interaktionsregionen zwischen RNA和P-Protein durch光交联，die Identifizierung weterer essentieller RNA- determinant durch体外选择和die experimentelle prefung der Ähnlichkeit des P-Proteins mit strukturbekannten逆转录病毒RTs durch functional分析gezielter muterter P-Protein。

Hepatitis B Viren replizieren über reverse Transkription eines RNA-Intermediates, der prägenomischen RNA. Anders als bei Retroviren initiiert die Reverse Transkriptase (RT), P-Protein, die Replikation nicht mittels eines Nukleinsäure-Primers, sondern de novo innerhalb des strukturierten e-RNA Elements. Die Aufklärung dieses ungewöhnlichen Mechanismus ist das langfristige Ziel des Projektes. Neben P-Protein und e enthält der Initiationskomplex Chaperone als essentielle Komponenten und kann nur mit in vitro translatiertem P-Protein des Enten-HepatitisB-Virus (DHBV) rekonstruiert werden. Eine biophysikalische Strukturaufklärung ist daher z.Zt. nicht möglich. Unser stattdessen biochemisch orientierter Ansatz hat gezeigt, daß die Komplexbildung eine drastische RNA-Strukturänderung induziert und für die Interaktion mit dem Protein wichtige Struktur-, Basen- und Rückgrat-abhängige RNA-Teilelemente definiert. Drei komplementäre Ansätze sollen nun verstärkt die Rolle des P-Proteins charakterisieren: die Kartierung der Interaktionsregionen zwischen RNA und P-Protein durch Photo-Crosslinking, die Identifizierung weiterer essentieller RNA-Determinanten durch in vitro Selektion und die experimentelle Prüfung der Ähnlichkeit des P-Proteins mit strukturbekannten Retrovirus RTs durch funktionelle Analyse gezielt mutierter P-Proteine.