Targetsequenzen der humanen O-Mannosyltransferase (POMT1/POMT2) in der O-Mannosylierung der alpha-Dystroglykan-Mucindomäne

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Auf der Grundlage rekombinanter Glykosylierungssonden konnten wir Evidenz für eine species- und zellunabhängige O-Mannosylierung der humanen alpha-Dystroglykan- Mucindomäne (hDG-M) erbringen, während andere O-Glykoproteine in den gleichen Zellen eine O-Glykosylierung vom Mucin-Typ erfahren. Diese Befunde weisen auf eine strikte Sequenzabhängigkeit des heterodimeren O-Mannosyltransferase-Komplexes hin. Zielsetzung des Vorhabens ist daher eine Eingrenzung der strukturellen Voraussetzungen für die POMT1/POMT2-Aktivität und ggfls. die Identifizierung spezifischer Sequenzmotive, die die O-Mannosylierung im ER induzieren. Diesem Ziel sollen dienen 1) die rekombinante Expression von Partialsequenzen der Mucindomäne in humanen Epithelzellen (EBNA-293) und murinen Myoblastenzellen (C2F3); 2) enzymatische in wfro-Ansätze mit synthetischen Peptidsubstraten in Kombination mit MALDI-Massenspektrometrie; und 3) Glykosylierungs-Analysen von Fusionsproteinen, die durch ortsspezifische Mutagenese generiert wurden. Durch globale Proteomik nach radiometabolischer Markierung sollen weitere Proteine mit O-Mannosylierung identifiziert und ihre ortsspezifische Modifikation analysiert werden.