大理石骨病マウス(oc/oc)の骨吸収異常に関する分子生物学的研究

骨硬化小鼠骨吸收异常的分子生物学研究（OC/OC）

• 批准号: 08771573
• 负责人: 豊澤 悟
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771573/
• 关键词: 大理石骨病; Differential display法; 骨芽細胞; 破骨細胞; コラーゲン

大理石骨病マウスにおいて破骨細胞の骨吸収機能異常を分子レベルで検討するため、骨芽細胞および破骨細胞のmRNA発現の変化をDIFFERENTIAL DISPLAY法により検討している。すなわち、oc/ocマウスの骨組織由来のものと、正常群のサンプル由来のものを比較し、発現パターンが変化した分子種を同定し、興味あるバンドを再増幅、クローン化し、シークエンスにかけ、塩基配列決定を行っている。抽出精製したmRNAにアンカープライマー溶液(dT12VA,dT12VC,dT12VG,dT12VTの4種に対してcDNAを作っておく;Anchor Kit Ver.2,operon社)を加え、AMV由来のreverse transcriptase(タカラ)により逆転写反応を行った。上記の逆転写物に任意プライマー溶液(10mer primer for differetial display;operon社)を加え、TaqDNA polymerase(ExpandTM High Fidelity;Boehringer Mannheim)によりDNA増幅装置(アステック・PC-7000・設置済み)で増幅させ、シークエンスゲルにアプライし泳動後、ゲルをオートラジオグラフィーし、DNAシーケンサ(共同研に設置済み)にて塩基配列を決定した。現在のところ、oc/ocマウスの方に強いシグナルを、正常群で弱いシグナルを示すもののバンドの一つにType-I collagenであると思われるクローンを見い出した。その他、多数の異なるパターンが見られるため、シークエンスゲルにかける前にてSSCPにて、もう1段階、スクリーニングする予定である。

为了研究破骨细胞破骨细胞在破骨细胞中的破骨细胞水平上破骨细胞的异常骨吸收功能，正在使用不同的显示方法进行研究。也就是说，该组与源自OC/OC小鼠的骨组织的组以及从正常组的样品中得出的组，鉴定出具有改变表达模式的分子物种，换句，克隆，克隆，测序和兴趣的测序。在提取的和纯化的mRNA上，为四种类型的锚固液溶液（DT12VA，DT12VC，DT12VG和DT12VT; Anchor KitVer。2，Operon）制备了cDNA，并使用AMV衍生的逆转录转录酶进行了逆转录。 An optional primer solution (10mer primer for differential display;operon) was added to the above reverse transcript, and amplified using a DNA amplification device (Astec PC-7000 installed) using a TaqDNA polymerase (Expand™ High Fidelity; Boehringer Mannheim), applied to a sequence gel, and after running, the gel was autoradiography and the base sequence was determined using a DNA音序器（安装在Kyodoken）。目前，我们发现了一个克隆，它似乎是在OC/OC小鼠中表现出强信号的频段之一，在正常组中表现出强信号。由于可以看到许多其他不同的模式，因此将使用SSCP筛选一个阶段，然后将其应用于序列凝胶。

项目成果

Toyosawa,S.: "Immunocytochemical localization of carbonic anhydrose isozyme II in the rat incisor epithelial cells at various stages of anelogensis." Cell & Tissue Res.285(2). 217-225 (1996)

Toyosawa,S.：“碳酸酐同工酶 II 在不同发育阶段的大鼠门牙上皮细胞中的免疫细胞化学定位。”