トランスジェニックリーシュマニアでの細胞表在性および分泌型蛋白質の発現

转基因利什曼原虫细胞表面和分泌蛋白的表达

• 批准号: 11770134
• 负责人: 河津 信一郎
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Research Institute, International Medical Center of Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770134/
• 关键词: 原虫; リーシュマニア; ワクチン; DDS

本研究では、原虫組換え体ワクチンの開発上必要不可欠となる原虫用遺伝子発現ベクターの改良を試み、細胞表在性あるいは分泌型の蛋白質として外来遺伝子が発現可能なプラスミドベクターを開発することを目的とする。持続感染による免疫が防御の主体となる原虫病では、細菌・ウイルスでの発現系を利用した組換え体ワクチンに満足のゆく効果が認められていない。このことから、対象となる原虫自体を運び手(Vehicle)として目的とする抗原を本来の感染プロセスを通じて、効率的に宿主に提示する技術(Delivery system)の開発が原虫病ワクチン開発の鍵とされている。本年度は、細胞表在性分子として外来蛋白質を発現可能な系を構築する目的で、リーシュマニアの表在性Zn-プロテアーゼ(gp63)とのキメラ蛋白質として目的分子が発現されるように、リーシュマニア用発現ベクター(p6.5)を改良した。gp63N末端のSignal配列およびC末端のGlycophosphatidylinositol(GPI)anchor acceptor配列に対応する遺伝子断片を、p6.5の外来遺伝子挿入部位(expression site)に挿入し、外来遺伝子がgp63のSignal配列とGPI anchor acceptor配列との間に挟まれて発現されるようにした(p6.5SE)。次に、p6.5SEを用いてGreen Fluorescent Protein(GFP)の発現を試みた。共焦点蛍光顕微鏡での観察の結果、プラスミド(p6.5SE-GFP)導入原虫では、細胞質内の膜系でGFPの発現が認められた。GFPの発現は原虫細胞表面でも、微量ではあったが、確認できた。

This study is aimed at improving the development of protozoan gene expression, cell phenotype, secretory protein and foreign gene expression. The main body of immune defense against infection, protozoan disease, bacteria, and other diseases is the use of a combination of body and tissue to identify the effects of infection. The development of a Delivery system for protozoan disease development is based on the transmission and transmission of antigen to the host. This year, we improved the expression of exogenous protein in cell surface molecules and the expression of exogenous protein in target molecules by constructing the expression system (p6.5). Gp63 N-terminal Signal Alignment and C-terminal Glycophosphatidylinositol(GPI)anchor acceptor alignment correspond to gene fragments, p6.5 foreign gene expression sites, and p6.5 foreign gene expression sites. In addition, p6.5SE was used to detect Green Fluorescent Protein(GFP). The results of confocal microscopy showed that GFP expression in protozoa and cytoplasmic membrane system was detected by p6.5SE-GFP GFP was found on the surface of protozoa, and trace amounts were identified.

项目成果

Matsumoto, Y. et al.: "Leishmaniasis in Central eurasia"Japanese Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 27. 59-62 (1999)

Matsumoto, Y. 等人：“中欧亚利什曼病”日本热带医学和卫生杂志。

河津信一郎: "リーシュマニア症"最新医学. 54. 289-297 (1999)

河津信一郎：“利什曼病”最新医学。54。289-297（1999）。

Hatabu,T. et al.: "The expression of biologically active canine interleukin-8 in Leishmania promastigates : anovel eukaryotic expression viecle"parasito.l. Iut.. (印刷中).

Hatabu, T. 等人：“生物活性犬白细胞介素 8 在利什曼原虫中的表达：新型真核表达 viecle”parasito.l.（正在出版）。

Terabe, M. et al.: "Non-ulcerative cutaueous lesion in immuodeficient mice with leishmania awazoueusis infection"Parasltology Interuatioual. 48. 47-53 (1999)

Terabe, M. 等人：“患有阿瓦祖利什曼原虫感染的免疫缺陷小鼠的非溃疡性皮肤病变”Parasltology Interuatioual。

河津信一郎: "現代の人獣共通感染症と獣医師の新たな役割"東獣ジャーナル. 421. 18-22 (2001)

河津真一郎：“现代人畜共患疾病和兽医的新角色”Tojuu Journal 421. 18-22 (2001)。