トランスジェニックリーシュマニアでの細胞表在性および分泌型蛋白質の発現

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究では、原虫組換え体ワクチンの開発上必要不可欠となる原虫用遺伝子発現ベクターの改良を試み、細胞表在性あるいは分泌型の蛋白質として外来遺伝子が発現可能なプラスミドベクターを開発することを目的とする。持続感染による免疫が防御の主体となる原虫病では、細菌・ウイルスでの発現系を利用した組換え体ワクチンに満足のゆく効果が認められていない。このことから、対象となる原虫自体を運び手(Vehicle)として目的とする抗原を本来の感染プロセスを通じて、効率的に宿主に提示する技術(Delivery system)の開発が原虫病ワクチン開発の鍵とされている。本年度は、細胞表在性分子として外来蛋白質を発現可能な系を構築する目的で、リーシュマニアの表在性Zn-プロテアーゼ(gp63)とのキメラ蛋白質として目的分子が発現されるように、リーシュマニア用発現ベクター(p6.5)を改良した。gp63N末端のSignal配列およびC末端のGlycophosphatidylinositol(GPI)anchor acceptor配列に対応する遺伝子断片を、p6.5の外来遺伝子挿入部位(expression site)に挿入し、外来遺伝子がgp63のSignal配列とGPI anchor acceptor配列との間に挟まれて発現されるようにした(p6.5SE)。次に、p6.5SEを用いてGreen Fluorescent Protein(GFP)の発現を試みた。共焦点蛍光顕微鏡での観察の結果、プラスミド(p6.5SE-GFP)導入原虫では、細胞質内の膜系でGFPの発現が認められた。GFPの発現は原虫細胞表面でも、微量ではあったが、確認できた。