感染マクロファージのアポトーシスの関与するカスパーゼファミリーの解析

参与感染巨噬细胞凋亡的Caspase家族分析

• 批准号: 11771371
• 负责人: 小関 健由
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771371/
• 关键词: Actinobacillus actinomycetemcomitans; アポトーシス; 歯周病; マクロファージ; caspase

若年性歯周炎の病原菌であるActinobacillus actinomycetemcomitansをマクロファージに感染させるとアポトーシスが誘導され、さらにこの菌の産生する新規毒素もマクロファージにアポトーシスを誘導することを我々は報告した。ここで歯周炎発症機序を解析するにあたり、この歯周病原菌によるアポトーシスの細胞内メカニズムの解析が大きな課題となった。一方、細胞のアポトーシスの実行分子は、カスパーゼと呼ばれる蛋白質分解酵素ファミリーであり、細菌の細胞内感染によるアポトーシス発症機序の場合のカスパーゼの関与は、サルモネラ菌および赤痢菌がCaspase-1を活性化してIL-1βの分泌を促進すること、およびレジオネラ菌がCaspase-3を活性化してアポトーシスを誘導することが報告されている。そこで本研究では、下位カスパーゼであるCaspase-1及びCaspase-3を活性化する上位カスパーゼであるCaspase-8及びCaspase-9の両者を検索した。J774.1細胞では、A.actinomycetemcomitansの感染マクロファージのアポトーシスの過程で両者が活性化することが示された。しかしながらどちらのCaspaseの活性化経路が重要であるかは、さらなる検証が必要であることも示された。そこで、A.actinomycetemcomitansの感染マクロファージのアポトーシスの過程をこれまでの実験に使用しているJ774.1細胞に加えて、レジオネラ菌の実験に使用されるマクロファージ細胞株RAW264.7細胞へのA.actinomycetemcomitansの感染実験系を確立した。さらにこのRAW264.7細胞にてアポトーシス抑制効果のあるBcl-2及びBcl-X_Lの形質転換株を作製した。この株を使用して上位のCaspaseの活性化経路を検索し、詳細を見当した。

我们报道说，用肌动杆菌肌动杆菌感染巨噬细胞，一种幼年牙周炎的病原体，凋亡，该细菌产生的新毒素也会诱导巨噬细胞中的凋亡。在分析牙周炎发育的机制时，分析牙周病原体引起的细胞内机制已成为主要挑战。 On the other hand, the molecules for cellular apoptosis are a family of proteolytic enzymes called caspases, and it has been reported that the involvement of caspases in the case of apoptosis-induced mechanisms caused by intracellular infection of bacteria is that Salmonella and Shigella activate Caspase-1 to promote IL-1β secretion, and Legionella activate Caspase-3 to induce apoptosis.因此，在这项研究中，搜索了caspase-8和caspase-9，它们是激活下层caspase caspase-1和caspase-3的优质caspase。在J774.1细胞中，两者在感染曲霉的巨噬细胞凋亡期间都被激活。但是，还表明，必须进一步验证以确定哪种caspase激活途径很重要。因此，除了在先前实验中使用的J774.1细胞外，我们还建立了一种在巨噬细胞系RAW264.7细胞上使用巨噬细胞系上使用的曲霉曲霉感染的实验系统，用于军团菌细菌的实验中。此外，在这些RAW264.7细胞中制备了具有抑制细胞凋亡的作用的Bcl-2和Bcl-X_L的转化菌株。该菌株用于搜索顶级胱天蛋白酶的激活途径并查找细节。

项目成果

Sakamoto M.et al.: "Phylogenetic analysis od saccharolytic oral treponemes isolated from human subgingival plaque"Microbiol.Immunol.. 43. 711-716 (1999)

Sakamoto M.等人：“从人类龈下菌斑中分离出的解糖口腔密螺旋体的系统发育分析”Microbiol.Immunol.. 43. 711-716 (1999)

Inohara,N., et al: "An induced proximity model for NF-kappaB activation in the Nod1/RICK and RIP signaling pathways"Journal of Biological Chemistry. 275. 27823-27831 (2000)

Inohara,N. 等人：“Nod1/RICK 和 RIP 信号通路中 NF-kappaB 激活的诱导邻近模型”生物化学杂志。

Yamato,K., et al: "Dissociation of bone morphogenetic protein-mediated growth arrest and apoptosis of mouse B cells by HPV-16 E6/7"Experimenal Cell Research. 257. 198-205 (2000)

Yamato,K. 等人：“HPV-16 E6/7 解离骨形态发生蛋白介导的小鼠 B 细胞生长停滞和凋亡”实验细胞研究。

Inohara N.et al.: "Nod1,an Apaf-1-like activator of caspase-9 and NF-kB"J.Biol.Chem.. 274. 14560-14567 (1999)

Inohara N.等人：“Nod1，caspase-9 和 NF-kB 的 Apaf-1 样激活剂”J.Biol.Chem.. 274. 14560-14567 (1999)

Okahashi,N., et al: "Osteoclast differentiation is associated with transient upregualtion of cyclin-dependent kinase inhibitor p21WAF1/CIP1 and p27KIP1"Journal of Cellular Biochemistry. 80. 339-345 (2001)

Okahashi,N. 等人：“破骨细胞分化与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1 和 p27KIP1 的瞬时上调有关”《细胞生物化学杂志》。