腸管におけるビタミンD受容体遺伝子の発達段階特異的発現制御機構

肠道维生素D受体基因发育阶段特异性表达调控机制

• 批准号: 12770617
• 负责人: 山本 浩範
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770617/
• 关键词: ビタミンD; ビタミンD受容体; 遺伝子発現; カルシウム; 腸管

ビタミンDは、腸管からのカルシウム吸収を促進する因子であり、骨代謝調節機構に重要な役割を果たしている。ビタミンDの生理作用は核内受容体であるビタミンD受容体(VDR)の機能を介して発揮される。VDRは、カルシウム・リン代謝調節の役割を担う臓器に強く発現しているが、腸管でのビタミンD作用効果は発達段階において異なり、主に離乳以降において増強することが知られている。すでに我々は、ヒトVDR遺伝子のプロモーター解析により、腸管特異的エンハンサー領域を同定し、ホメオボックス遺伝子であるCdx-2がVDR遺伝子の小腸での発現に重要は働きをしていることを明らかにした。本研究では、腸管におけるビタミンD受容体遺伝子の発達段階特異的発現制御機構の解明を試みた。ラット小腸よりラットCdx-2cDNAをクローニングし、発達段階におけるCdx-2発現をノーザンブロット法により確認した結果、VDR発現は、生後4週より著しく誘導するのに対し、Cdx-2発現は離乳期前後において全く変動しないことが明らかになった。また、離乳を一週早めた早期離乳ラット小腸においては、VDRの発現誘導時期は早まるが、Cdx-2においては変化は見られなかった。さらに、同定したヒトVDR遺伝子の腸管特異的エンハンサー配列を含む合成DNA断片をプローブとし、授乳期(2週齢)のラット小腸粘膜から抽出した核蛋白質を用いてゲルシフトアッセイを行った結果、Cdx-2の結合は確認されなかった。以上のことから、VDR遺伝子の発達段階特異的発現制御にはCdx-2の発現誘導は必須でなく、授乳期においてCdx-2機能を制御する因子の存在が重要であることが示唆された。今後、酵母One-hybrid法およびTwo-hybrid法を用いた発達段階特異的発現制御因子の検索を行う予定である。

ビ タ ミ ン D は, insufflate か ら の カ ル シ ウ ム suction 収 を promote す る factor で あ り, bone metabolic regulation institutions に important な "を cut fruit た し て い る. Youdaoplaceholder0 ビタ <s:1> D <s:1> physiological function であるビタ nuclear acceptor であるビタ <s:1> <s:1> D acceptor (VDR) <s:1> function を mediates て plays される. VDR は, カ ル シ ウ ム · リ ン metabolic regulation の "を cut bear う viscera strong に く 発 now し て い る が, insufflate で の ビ タ ミ ン D effect unseen fruit は 発 da Duan Jie に お い て different な り, main に from milk to に お い て raised strong す る こ と が know ら れ て い る. System す で に I 々 は, ヒ ト VDR posthumous son 伝 の プ ロ モ ー タ ー parsing に よ り, insufflate specific エ ン ハ ン サ を ー field with し, ホ メ オ ボ ッ ク ス posthumous son 伝 で あ る Cdx system - 2 が VDR heritage 伝 son の small intestine で の 発 に now important は 働 き を し て い る こ と を Ming ら か に し た. This study で で, the intestinal におけるビタ, the <s:1> D acceptor remnant 伝, and the specific occurrence control mechanism of the <s:1> occurrence stage 伝 explain を test みた. ラ ッ ト small intestine よ り ラ ッ ト Cdx - 2 cdna を ク ロ ー ニ ン グ し, 発 Duan Jie に お け る Cdx - 2 発 now を ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト method に よ り confirm し た system results, VDR 発 は, 4 weeks after birth よ り the し く induced す る の に し seaborne, Cdx - 2 発 は now from before and after breast feeding に お い て full く - move し な い こ と が Ming ら か に な Youdaoplaceholder0. ま た, from milk を a week early め た early from milk ラ ッ ト small intestine に お い て は system, VDR の 発 は early induction period now ま る が, Cdx - 2 に お い て は variations change は see ら れ な か っ た. さ ら に, with し た ヒ system ト VDR posthumous son 伝 の insufflate specific エ ン ハ ン サ ー match column を containing む synthetic DNA fragment を プ ロ ー ブ と し, lactation period (2 weeks 齢) の ラ ッ ト intestinal mucosa か ら spare し た nuclear protein を い て ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ を line っ た results, Cdx - 2 の combining は confirm さ れ な か っ た. Above の こ と か ら system, VDR heritage 伝 son の 発 da Duan Jie specific 発 now suppression に は Cdx - 2 の 発 induced は must now で な く, lactation period に お い て Cdx - 2 function を suppression す る factors の が important で あ る こ と が in stopping さ れ た. In the future, the yeast One-hybrid method およびTwo-hybrid method を is determined by using the specific occurrence control factor of the <s:1> た occurrence stage and the <s:1> 検 rope を to う determine である.

项目成果

Takeda E.: "Molecular mechanisms of mammalian inorganic phosphate homeostasis."Advan.Enzyme.Regul.. 40. 285-302 (2000)

Takeda E.：“哺乳动物无机磷酸盐稳态的分子机制。”Advan.Enzyme.Regul.. 40. 285-302 (2000)

Yamamoto,H.: "Effects of Vitamin K_2 on the Transcriptional Activity of 1,25(OH)_2D_3-Regulated Genes"Journal of Bone and Mineral Research. 15. S212 (2000)

Yamamoto,H.：“维生素 K_2 对 1,25(OH)_2D_3 调节基因转录活性的影响”骨与矿物质研究杂志。