霊長類ES細胞および臍帯血からの肝細胞への分化誘導と再生医療に向けた基礎的研究

灵长类ES细胞和脐带血诱导分化为肝细胞的基础研究和再生医学

• 批准号: 15659067
• 负责人: 寺岡 弘文
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659067/
• 关键词: 再生医療; ES細胞; 臍帯血; 肝細胞; 肝細胞移植; 細胞融合; 細胞分化; 霊長類; 肝臓移植

ヒト臍帯血有核細胞および多能性前駆細胞から肝細胞への分化誘導 ヒト臍帯血有核細胞をHGF/FGF/SCF/LIFを添加した培地にて培養すると、アルブミン陽性・CK-19陰性の成熟肝細胞とアルブミン陽性・CK-19陽性の肝前駆細胞に分化するが、アルブミン陰性・CK-19陽性の胆管上皮細胞は認めなかった(Stem Cells,2003)。そこで、胆管上皮細胞への分化を図るべく、胆汁酸を添加して培養したところ、CK-19のみ陽性である胆管上皮細胞様細胞を免疫染色によって確認できた。肝前駆細胞、肝細胞、胆管上皮細胞の誘導条件をさらに詳しく解析中である。肝障害マウス中での移植肝細胞への分化誘導と増幅 カニクイザルES細胞から形成した胚様体を接着培養することにより、アルブミンとCK-18の抗体に陽性な肝細胞様細胞を分化誘導できた。Cyp3a1遺伝子発現はどちらもリファンピシンで誘導され、機能的肝細胞の誘導が示唆された。次に、接着培養胚様体由来細胞を肝障害モデルであるuPA/SCIDマウスに経脾門注したところ、マウス肝臓中にサルアルブミンを発現する肝細胞塊が高頻度に得られ、マウス血清中にサルアルブミンも検出できた。サルアルブミンを発現する肝細胞様細胞のほとんど全ての細胞核には、サルの染色体と共にマウスの染色体が認められたことから、サルES細胞から分化した細胞とマウス肝細胞の細胞融合の結果であることが判明した。サルES細胞を移植すると奇形腫は形成されるが、サル由来肝細胞様細胞も融合細胞も認められない。本結果は、霊長類ES細胞由来細胞が、機能的な肝細胞として移植肝臓中に生着することを初めて示したものである。マウスES細胞由来胚様体中の未分化細胞の除去による奇形腫形成回避 マウスES細胞から懸滴培養で得た胚様体を接着培養することによって肝細胞への分化誘導を証明してきたが、これら分化細胞中には奇形腫の原因となる未分化細胞が含まれている。肝細胞画分からパーコールによる遠心分離とPECOM-1抗体を用いたMACS法によって未分化細胞を除去することによって奇形腫形成を阻止できた。本成果は、霊長類ES細胞からの肝細胞への分化誘導研究にも応用できる

Umbilical blood nucleated cells and pluripotent progenitor cells were cultured with HGF/SCF/LIF, and mature hepatocytes with CK-19 negative were cultured with HGF/SCF/LIF, CK-19 positive progenitor cells were cultured with HGF/SCF/LIF, CK-19 positive bile duct epithelial cells were cultured with HGF/SCF/LIF (Stem Cells,2003). Bile duct epithelial cells were identified by immuno staining for CK-19 positive cells. The induction conditions of hepatic precut cells, hepatocytes and bile duct epithelial cells were analyzed in detail. Induction of differentiation of transplanted hepatocytes in liver injury and induction of differentiation of hepatocytes positive for CK-18 antibody in embryonic culture Cyp3a1 gene expression is induced by the activation of the enzyme and the induction of functional hepatocytes. In the next step, cultured embryonic-derived cells were isolated from liver cells with high frequency in uPA/SCID and liver cell mass. The result of cell fusion of liver cells was identified. ES cell transplantation is a process for the formation of abnormal tumors, and fusion of cells from hepatocytes is a process for the identification of abnormal tumors. These results indicate that ES cells are derived from cells and function as hepatocytes in liver transplantation. ES cells derived from embryos were removed from embryos and then cultured in suspension to demonstrate differentiation of hepatocytes. Hepatocyte differentiation by MACS method to remove undifferentiated cells and prevent tumor formation The results of this study are useful in the induction of differentiation of hepatocytes from ES cells.

项目成果

臍帯血由来細胞と再生医療の近未来.(特集:臍帯血由来細胞と再生医療・細胞治療の展望、寺岡弘文編)

脐带血来源的细胞和再生医学的近期前景（专题：脐带血来源的细胞以及再生医学和细胞治疗的前景，寺冈博文编辑）

• 发表时间: 2004
• 期刊: 細胞 36
• 作者: Asahina K;et al.;寺岡弘文
• 通讯作者: 寺岡弘文

Hepatocyte differentiation from embryonic stem cells and umbilical cord blood cells

胚胎干细胞和脐带血细胞分化为肝细胞

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Hepatobiliary Pancreatic Surgery 12
• 作者: Teramoto K;et al.
• 通讯作者: et al.

Expression of the liver-specific gene Cyp7a1 reveals hepatic differentiation in embryoid bodies derived from mouse embryonic stem cells

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2004.00809.x
• 发表时间: 2004-12-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Asahina, K;Fujimori, H;Teraoka, H
• 通讯作者: Teraoka, H

Teratoma formation and hepatocyte differentiation in mouse liver transplanted with mouse embryonic stem cell-derived embryoid bodies.

• DOI: 10.1016/j.transproceed.2004.12.120
• 发表时间: 2005
• 期刊: Transplantation proceedings
• 影响因子: 0.9
• 作者: K. Teramoto;Y. Hara;Y. Kumashiro;Ryoko Chinzei;Yujiro Tanaka;K. Shimizu‐saito;K. Asahina;H. Teraoka;S. Arii

ES細胞・臍帯血と肝細胞移植

ES细胞/脐带血和肝细胞移植

• 发表时间: 2004
• 期刊: 小児外科 36
• 作者: 寺岡弘文;朝比奈欣治;齊藤佳子
• 通讯作者: 齊藤佳子