Wntシグナル経路における受容体のエンドサイトーシスを解析する実験系の確立

Wnt信号通路受体内吞分析实验体系的建立

• 批准号: 15659077
• 负责人: 菊池 章
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659077/
• 关键词: 受容体; エンドサイトーシス; Wnt; β-カテニン; Frizzled; ダイナミン; リサイクリング

Wntシグナル経路の解析において最も研究が遅れているのは、Wntとその受容体のエンドサイトーシスの制御機構に関するものである。本研究では、他の受容体で行なわれているようなエンドサイトーシスの実験系の確立することを目的として、本年度は下記の成果を得た。(1)ダイナミンK44Aはアドレナリン受容体刺激によるエンドサイトーシスを抑制することが知られているが、ダイナミンK44AはWnt-3a依存性のβ-カテニンの蓄積を抑制した。また、EpsinのENTH領域がインスリンとEGFの受容体のエンドサイトーシスを阻害するが、ENTH領域もWnt-3a依存性のβ-カテニンの蓄積を抑制した。さらに、クラスリンを安定化させ、受容体のエンドサイトーシスを阻害するダンシルカダベリンを細胞に作用させると、Wnt-3a依存性のβ-カテニンの蓄積が減少した。したがって、Wnt-3aによるβ-カテニン経路の活性化には、受容体のエンドサイトーシスが必要であることが示唆された。(2)Flag tagを付加したFrizzled 8(Wnt-3aの受容体の一つ)を発現した293細胞に、Wnt-3a conditioned mediumを作用させ、Frizzled 8がエンドサイトーシスされる様子を観察した。Wnt-3aを作用させる前には、細胞膜上に存在していたFrizzled 8は30〜60分後に細胞内の小胞上に局在して、120分後には、再び細胞膜上に見出された。したがって、Frizzled 8はWnt-3aと結合した後に、細胞内に取り込まれ、その後に再利用されると考えられた。この実験系は、Wntとその受容体のエンドサイトーシスの解析する上で有用である。以上の結果から、本研究課題は計画通りに遂行されたと判断している。

The analysis of Wnt system is the most important part of the research on the control mechanism of Wnt system This study aims to establish a system for the management of other receptors, and to achieve the following results this year. (1)K44A inhibits the accumulation of Wnt-3a dependent β-receptors. The domain of Epsin inhibits the accumulation of Wnt-3a-dependent β-cells. In addition, the accumulation of Wnt-3a-dependent β-cells was reduced due to the stabilization of Wnt-3a-dependent cells, the inhibition of Wnt-3a-dependent cells, and the inhibition of Wnt-3a-dependent cells. It is clear that the activation of the β-TENIN network in Wnt-3a makes it necessary to provide end-user support for the container. (2)Flag tag was added to Frizzled 8(Wnt-3a receptor) to detect 293 cells, Wnt-3a conditioned medium and Frizzled 8. Wnt-3a was present on the cell membrane before and after 30 to 60 minutes, and was present on the cell membrane after 120 minutes. Wnt-3a, Wnt-3a This is a useful way to analyze the contents of a container. The above results show that this research project has been carried out in accordance with the above judgment.

项目成果

Nakayama K.: "Impaired degradation of inhibitory subunit of NF-κB (IκB) and β-catenin as a result of targeted disruption of the β-TrCP1 gene"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 100・15. 8752-8757 (2003)

Nakayama K.：“β-TrCP1 基因的靶向破坏导致 NF-κB (IκB) 和 β-catenin 抑制亚基的降解受损”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 100・15。 8757 (2003)

Hino S.: "Casein kinase Iε enhances the binding of Dvl-1 to Frat-1 and is essential for Wnt-3a-induced accumulatin of β-catenin"J.Biol.Chem.. 278・16. 14066-14073 (2003)

Hino S.：“酪蛋白激酶 Iε 增强 Dvl-1 与 Frat-1 的结合，对于 Wnt-3a 诱导的 β-catenin 积累至关重要”J.Biol.Chem.. 278・16（2003 年） ）

Salas, T.R.: "Alleviating the suppression of glycogen synthase kinase-3β by Akt leads to the phosphorylation of CREB and its transactivation in intact cells nuclei"J.Biol.Chem.. 278・42. 41338-41346 (2003)

Salas, T.R.：“减轻 Akt 对糖原合成酶激酶 3β 的抑制导致 CREB ​​磷酸化及其在完整细胞核中的反式激活”J.Biol.Chem.. 278・42 (2003)。

Nagano Y.: "Siah-1 facilitates ubiquitination and degradation of synphilin-1, and is involved in dopamine release and biosynthesis"J.Biol.Chem.. 278・58. 51504-51514 (2003)

Nagano Y.：“Siah-1促进synphilin-1的泛素化和降解，并参与多巴胺的释放和生物合成”J.Biol.Chem.. 278・58（2003）。

Sakashita G.: "Regulation of type 1 protein phosphatase/inhibitor-2 complex by glycogen synthase kinase-3β in intact cells"J.Biochem.. 133・2. 165-171 (2003)

Sakashita G.：“完整细胞中糖原合成酶激酶-3β对 1 型蛋白磷酸酶/抑制剂 2 复合物的调节”J.Biochem.. 133・2（2003）。