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Wntシグナル経路における受容体のエンドサイトーシスを解析する実験系の確立

Wnt信号通路受体内吞分析实验体系的建立

基本信息

批准号：
15659077
负责人：
菊池章
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659077/
关键词：
受容体エンドサイトーシス Wnt β-カテニン Frizzled ダイナミンリサイクリング

项目摘要

Wntシグナル経路の解析において最も研究が遅れているのは、Wntとその受容体のエンドサイトーシスの制御機構に関するものである。本研究では、他の受容体で行なわれているようなエンドサイトーシスの実験系の確立することを目的として、本年度は下記の成果を得た。(1)ダイナミンK44Aはアドレナリン受容体刺激によるエンドサイトーシスを抑制することが知られているが、ダイナミンK44AはWnt-3a依存性のβ-カテニンの蓄積を抑制した。また、EpsinのENTH領域がインスリンとEGFの受容体のエンドサイトーシスを阻害するが、ENTH領域もWnt-3a依存性のβ-カテニンの蓄積を抑制した。さらに、クラスリンを安定化させ、受容体のエンドサイトーシスを阻害するダンシルカダベリンを細胞に作用させると、Wnt-3a依存性のβ-カテニンの蓄積が減少した。したがって、Wnt-3aによるβ-カテニン経路の活性化には、受容体のエンドサイトーシスが必要であることが示唆された。(2)Flag tagを付加したFrizzled 8(Wnt-3aの受容体の一つ)を発現した293細胞に、Wnt-3a conditioned mediumを作用させ、Frizzled 8がエンドサイトーシスされる様子を観察した。Wnt-3aを作用させる前には、細胞膜上に存在していたFrizzled 8は30〜60分後に細胞内の小胞上に局在して、120分後には、再び細胞膜上に見出された。したがって、Frizzled 8はWnt-3aと結合した後に、細胞内に取り込まれ、その後に再利用されると考えられた。この実験系は、Wntとその受容体のエンドサイトーシスの解析する上で有用である。以上の結果から、本研究課題は計画通りに遂行されたと判断している。

The most important part of the research is that the most important thing in the Wnt system is the tolerance of the capacitive body, the system of the imperial engine. The purpose of this study is to make sure that the purpose of this study is to achieve the results of this year. The main results are as follows: (1) there is no significant difference between the two groups. (1) there is no significant difference between K44A and K44A in terms of Wnt-3a dependence, β-tolerance and inhibition. In the field of ENTH, Epsin, Wnt-3a dependence, Wnt-3a dependence, β-dependence, inhibition, tolerance, inhibition, inhibition and inhibition. The drug is stable, the receptive body is stable, the receptive body is sensitive, the cell is sensitive, and the Wnt-3a dependence is β-dependent. There is no reason for the activation of the circuit, and for the receptive body, it is necessary to indicate that it is necessary to instigate. (2) Flag tag payment plus Frizzled 8 (Wnt-3a receptor 1), Wnt-3a conditioned medium action, Frizzled 8 cell, Frizzled 8 cell, cell cycle, cell cycle, cell count, cell count, cell number, cell count, cell number, cell size, cell Before and after the action of Wnt-3a, there was a small cell wall on the membrane of Frizzled 8, 30 and 60 minutes later, and the supernatant of small cells appeared on the cell membrane after 120 minutes. After the combination of the Frizzled 8 Wnt-3a, the intracellular DNA was collected, and then the drug was reused. Please tell me that the system, Wntmeter, capacitor, receiver, receiver As a result of the above results, the project of this study has been successfully conducted to determine the outcome of the study.