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ニワトリB細胞株を用いたヒトDNA修復遺伝子のSNPの機能評価

使用鸡 B 细胞系对人类 DNA 修复基因中的 SNP 进行功能评估

基本信息

批准号：
16651100
负责人：
松田文彦
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト遺伝子のSNP解析で得られた情報は、個々のSNPの機能評価の裏付けがあって初めて生物学的意味を持つ。現在までに膨大な数のSNPが同定されているが、遺伝子のコーディング領域に存在するSNPと遺伝子産物の構造や機能の変化、すなわち質的影響に関してはほとんど解析されていない。本研究では、SNPが遺伝子機能に与える質的影響について、SNPをもつDNA修復遺伝子の機能を細胞レベルで容易に判定できるニワトリDT40細胞株を用いて、ヒトDNA修復遺伝子Rad51、XRCC2について調べた。DT40細胞株の外来DNA断片を導入した時極めて高頻度に相同組換えを起こす性質を利用して、ニワトリRad51、XRCC2を破壊した変異細胞株に、それぞれヒトRad51、XRCC2のアミノ酸変異を伴う一塩基多型を含むcDNAと野生型のcDNAを細胞に導入した。ヒト遺伝子の発現を確認した後、それぞれの細胞株の放射線或はシスプラチンに対する感受性を、生存する細胞数を指標に比較した。Rad51に関しては、野生型、変異型cDNAを導入し、安定に発現する細胞株を数株づつ樹立した。ガンマ線照射、シスプラチン処理の両法を用いてSNPの遺伝子機能に対する影響を調べたが、特に大きな差は見られなかった。XRCC2も同様にヒト遺伝子を安定して発現する細胞株を数株づつ樹立し、Rad51と同様に、ガンマ線照射、シスプラチン処理を行った。ガンマ線照射では野生型、変異型の間に大きな差は見られなかった。これはXRCC2はガンマ線によるDNAダメージの修復には深く関わっていないという報告と一致していた。一方シスプラチン処理では、変異型細胞株が野生型に対して約2倍感受性が高い結果が、第一回目のアッセイで得られた。現在、細胞株の数を増やして再現性の確認を行っているこの系を用いるとSNPを持つヒトDNA修復遺伝子の機能を迅速に決定でき、多型・変異遺伝子の機能評価の方法として、最も感度がよく信頼性のある方法である。現在さらに遺伝子数を増やして、系統的にヒトSNPの機能評価を進めている。

The SNP analysis shows that there is a great deal of information about the meaning of primary biology and the ability of SNP to pay attention to the meaning of primary biology. At present, the number of SNP is the same as that in the field where there is an increase in the number of SNP products in the field of industrial production. In this study, the sub-machine of the SNP engine can be used with the shadow computer of the computer, the SNP machine, the DNA machine, the cell phone, the cell line, the Rad51, the XRCC2, the cell line, the cell line. When foreign DNA fragments of DT40 cell lines were introduced into the environment, they were highly sensitive to the presence of wild-type cDNA genes in the same group, such as cell lines, Rad51, XRCC2 genes, wild-type cDNA genes, gene polymorphisms, wild-type cDNA genes, DNA fragments, DNA fragments, DNA fragments, After the confirmation, the radiation of the cell line or the number of cells in the cell line is sensitive, and the number of survival cells refers to the number of cells. Several cell lines were isolated from Rad51, wild type, wild type and diazepam type cDNA. On-line irradiation, monitoring and monitoring methods are used to monitor the impact of the SNP sub-machine on the transmission and monitoring of the computer, especially in the case of high-speed transmission. XRCC2 showed that several cell lines were isolated, Rad51 cells were co-isolated, radiation lines were irradiated, and cell lines were analyzed. The wild type, the wild type and the wild type, the wild type and the wild type. The XRCC2 reports are consistent with each other. The reports are consistent. On one side, the cell lines of wild type and wild type were about 2 times as susceptible, and the results of the first visit showed that the cell lines of wild type and wild type were highly sensitive. At present, the number of cells can confirm that the system can use the SNP to maintain the DNA repair machine to quickly determine the accuracy, the multi-type machine can be used to determine the accuracy, and the most sensitive method can be used to determine the accuracy. At present, the number of children of the system is very low, and the SNP of the system is in progress.