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造血系の構築および悪性化を制御するマスター遺伝子の同定

控制造血系统构建和恶性转化的主基因的鉴定

基本信息

批准号：
16659249
负责人：
黒川峰夫
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659249/
关键词：
AML1 造血細胞ノックアウトアウス AGM培養転写活性化能

项目摘要

AML1は成体型造血の幹細胞の産生に重要な役割を果たす転写因子である。AML1の機能不全は造血系の欠如を引き起こすとともに、臨床的には高頻度にヒト白血病発症に関与する。しかしAML1の造血細胞産生能を効率的に評価する系がないため、AML1がどのような機能を通して造血系を構築・維持するかは不明である。最近、われわれはストローマ細胞上でマウスの大動脈・性腺・中腎(aorta-gonad-mesonephros: AGM)領域を培養することにより、in vitroで造血細胞の産生を再現する系を確立した。この系では、AML1ノックアウトマウス由来のAGM領域(AML1-/-AGM)からは造血細胞が産生されない。本研究ではまずAML1-/-AGMにレトロウィルスを用いてAML1を再導入し、造血細胞の産生を回復する系の樹立を試みた。条件検討の結果、SCF,IL3,OSMを含む培地でOP-9細胞と共培養した胎生9.5日のAML1-/-AGMに対して、AML1を発現するレトロウィルスを感染させることにより、効率的に造血細胞の産生を回復させることに成功した。産生された造血細胞は、野生型AGM由来のものと同様に、CD45,CD34,Sca-1,c-Kit,Gr1/Mac1などの造血系表面マーカーを発現していた。この系を利用してAML1のさまざまな変異体の造血回復能を調べたところ、AML1のDNA結合領域と転写活性化領域の両者が造血細胞産生能に必要であった。またわれわれがヒト症例から見出したAML1変異体(AML1 R139G)は、造血能を失っていた。またAML1のアイソフォームであるAML2やAML3も、AML1-/-AGMの造血細胞産生を回復することが明らかとなり、アイソフォーム間での機能的な重複が判明した。

AML1 is an important factor in the production of hematopoietic stem cells AML1 dysfunction is associated with poor hematopoietic lineage, high clinical frequency, and leukemia development. The evaluation of the hematopoietic cell production efficiency of AML1 is unclear. Recently, the reproduction of hematopoietic cells in culture in the aorta-gonad-mesonephros (AGM) domain has been established. AML1-/-AGM is the domain of origin of hematopoietic cells. In this study, we attempted to reintroduce AML1-/-AGM and establish a hematopoietic cell regeneration system. The results of the conditional assay showed that OP-9 cells co-cultured with SCF, IL3,OSM and AML1-/-AGM at 9.5 days of gestation were successfully infected with the virus and recovered from hematopoietic cell production. CD45, CD34,Sca-1,c-Kit, Gr1/Mac1, and the like. This is necessary for the regulation of hematopoietic regeneration by using AML1 and its DNA binding domain and its activation domain. AML1 variant (AML1 R139G) is a new type of hemopoietic disorder. AML1, AML2, AML3, AML1-/-AGM and hematopoietic cell production were restored.