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ステロイドホルモン誘導性non-codingRNAの生理機能と発現調節機構の解明

阐明类固醇激素诱导的非编码RNA的生理功能和表达调控机制

基本信息

批准号：
18659274
负责人：
高柳涼一
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

DNAから転写されるRNAは蛋白をコードするmRNAばかりでなく蛋白をコードしないゲノム領域からも転写される(転写産物はnon-codingRNAと呼ばれる)。ステロイドホルモンによる転写調節において未知のnon-coding RNAがホルモン調節系に関与している可能性がある。このような最近のRNA worldに関する新知見を背景に本研究は(1)ステロイドホルモン応答性のnon-coding RNAをcloningする、(2)そのホルモン応答性と機能を解析する、ことを目的として、本年度は以下の解析を行った。1)ステロイドホルモン応答性のnon-coding RNAのcloningとステロイド応答性の確認マウスの骨芽細胞(初代培養系)と乳腺由来細胞(MCF7)をグルココルチコイドあるいはエストラジオール(10^<-7>M)で処理後、H19年度に得られたcloneについて、蛋白をcodeするものを除いて、定量RT-PCR装置により、cycloheximide処理下、ステロイドホルモン応答性を検討した。さらに、Northern blot法で確認した。non-coding RNA候補として21個のcloneを得たが、予想外に偽陽性クローンが多く、Northern blot法で有意に発現が増加したものは1個のみであった。2)ステロイドホルモン応答性のnon-coding RNAのpromoterのcloningとホルモン応答性の解析。1個のnon-coding RNAをコードする候補遺伝子について、promoter領域を市販のマウスゲノムライブラリーよりcloningし、reporter luciferase geneをつないで、ホルモン応答性を検討し、デキサメタゾン(10^<-7>M)添加でluciferase活性が1.5倍に上昇した。以上の、これまでの研究結果を総合すると、ステロイドホルモン応答性のnon-coding RNAの数は少なく、また、応答性は低くいが、その存在の可能性が示唆された。

DNA coding RNA coding protein coding mRNA coding protein coding The possibility of unknown non-coding RNA in the regulatory system is unknown. This study includes (1) the cloning of non-coding RNA,(2) the functional analysis of non-coding RNA, and (3) the purpose of this study. 1) Cloning and identification of non-coding RNA for gene response in bone bud cells (primary culture line) and mammary gland derived cells (MCF7). After treatment (10 μ <-7>M), clone detection, protein code removal, quantitative RT-PCR device detection, cycloheximide treatment, gene response detection. Northern blot method was used to confirm the results. Non-coding RNA candidates were found in 21 clones, and the number of clones was increased intentionally by Northern blot. 2) Analysis of the cloning and response of the promoter of non-coding RNA. 1 non-coding RNA candidate gene, promoter domain, reporter luciferase gene, response profile, promoter domain (10^<-7>M), luciferase activity increased by 1.5 fold. The results of these studies are summarized as follows: the number of non-coding RNAs that are responsive is small, the reactivity is low, and the possibility of their existence is demonstrated.