EF2のジフタマイド構造の生理的意義とADPリボシル化・リン酸化の役割

EF2二邻苯二甲酰胺结构的生理意义以及ADP核糖基化和磷酸化的作用

• 批准号: 04833017
• 负责人: 河野 憲二
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04833017/
• 关键词: ジフタマイド; EF-2; ADP-リボシル化; ジフテリア毒素

1.EF-2のジフタマイドに変換されるHis残基の役割出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)では、ジフタマイドに翻訳後修飾されるHis残基はEF-2の699番目にあたる。このHis残基を他の19個のアミノ酸に置換した変異型EF-2遺伝子を作成、そのプラスミドを導入し、それのみを発現している細胞を遺伝的操作により得ることで、変異型EF-2がin vivoでどのような生理活性をもっているか検討した。細胞増殖を指標にするとこれらは、大きく3つの表現型を示した。一番目は、EF-2としての活性を保持しているものでジフテリア毒素には、非感受性を示すもの、第二は、EF-2としての活性を失っているもの、第三は、EF-2としての活性を失っているのみでなく、野生型のEF-2の活性を防害するものである。2.ADPリボシル化の生理的意義を探るために、毒素耐性型EF-2(毒素によるADPリボシル化を全く受けない)のみを発現している細胞を作成し、mating,sporulation,germination,growthなどについて詳細に調べたが、現在のところ酵母では、野生型EF-2と比較して大きな差異を検出することはできなかった。上記の結果、ジフタマイドの生理的意義については未だ明確な解答を得ることはできていない。しかし(1)の結果は、ジフタマイドの構造と機能に関しての新しい情報であり、この点を詳細に検討し生理機能を明らかにする突破口としたい。

1. The EF-2 gene is modified by the substitution of His residues in Saccharomyces cerevisiae. The 19 amino acid substitutions of these residues in the mutant EF-2 gene were used to construct, introduce, and develop the mutant EF-2 gene in vivo. Cell proliferation index is expressed in three phenotypes. For one thing, the activity of EF-2 remains unchanged while the toxin is non-sensitive; for another, the activity of EF-2 remains unchanged; for another, the activity of EF-2 remains unchanged; and for another, the activity of wild-type EF-2 remains unchanged. 2. To explore the physiological significance of ADP release, the toxin resistant EF-2(toxin resistant ADP release) was developed in the cell production, mating,sporulation,germination,growth, and in detail, the difference between the wild type EF-2 and the present yeast was analyzed. The results of the above note, the physiological meaning of the word, are not clear. The answer is not clear. The results of this study are as follows: (1) The structure and function of the plant are related to the new information, and the physiological function of the plant is discussed in detail.

项目成果

大村 文彦: "ジフテリア・トキシンとその作用標的EF-2" Cell Science. 8. 355-363 (1992)

Fumihiko Omura：“白喉毒素及其靶标 EF-2”《细胞科学》8. 355-363 (1992)。

河野 憲二: "ジフテリア毒素の毒性と耐性の分子機構" 蛋白質核酸酵素. (1993)

Kenji Kono：“白喉毒素毒性和抗性的分子机制”蛋白质核酸酶（1993）。

Kenji Kohno: "The promotor region of the yeast KAR2 gene contains a regulatory domain that responds to the presence of unfolded proteins in the endoplasmic reiculum." Mol.Cell.Biol.13. 877-890 (1993)

Kenji Kohno：“酵母 KAR2 基因的启动子区域包含一个调节结构域，可以对内质网中未折叠蛋白的存在做出反应。”

Naoko Imamoto: "Antibodies against 70KD heat shock cognate protein inhibit mediated nuclear import of karyophilic proteins." J.Cell Biol.119. 1047-1061 (1992)

Naoko Imamoto：“针对 70KD 热休克同源蛋白的抗体抑制介导的亲核蛋白的核输入。”

Yukio Kimata: "Expression of non-ADP-ribosylatable,diphtheria toxin-resistant elongation factor 2 in Saccharomyces cerevisiae." Biochem.Biophys.Res.Commun.(1993)

Yukio Kimata：“非 ADP 核糖基化、白喉毒素抗性延伸因子 2 在酿酒酵母中的表达。”