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ジフテリア毒素を利用した核輪送に関与する変異細胞の単離とその解析

ジフテリア毒素を利用した核輪送に関与する変異細胞の単離とその解析
使用白喉毒素分离和分析参与核转位的突变细胞
批准号：
03833021
负责人：
河野 憲二
金额：
$1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1991 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03833021/
关键词：
核輸送核移行シグナル酵母ジフテリア毒素

项目摘要

项目成果

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本年度は、核輸送に関与する変異細胞を出芽酵母から単離するための系の確立を目指した。まず哺乳動物の系で核移行シグナルとして明らかになっているSV40ウィルスT抗原由来のアミノ酸配列が酵母の系で働くかどうかを、酵母のインベルタ-ゼのアミノ末端に付加したものを用い、蛍光抗体法により調べた。この結果、野生型の核移行シグナル(KKKRK)を付加したインベルタ-ゼは核に移行すること、また1アミノ酸置換した変異型核移行シグナル(KTKRK)を付加したものは核に移行できないこと、酵母でも蛍光抗体法により核移行したかしないかを区別できることが明かとなった。次にジフテリア毒素A断片(DTA)の細胞内局在をかえることにより核への移行に異常を有する変異細胞を得るため、DTAのアミノ末端にSV40の核移行シグナル、あるいは変異型核移行シグナルを付加した遺伝子を作成し、培地の変換(グルコ-スからガラクト-スに変換)により遺伝子産物の誘導が行える系を作成した。これらのプラスミドを形質転換した酵母は、グルコ-ス培地では生育できること、ガラクト-ス培地に変えると生育できないことから誘導的に毒素が生産されていることがわかったが、核移行型に変換した毒素を発現させた場合でも顕著なタンパク合成阻害がかかり選択系としては不適当であることが判明した。現在大腸菌由来のβーガラクトシダ-ゼに酵母のリボソ-ムタンパクL29の核移行シグナルを付加した融合遺伝子を作成し、新しい選択マ-カ-として使うべく準備をしている。また核内から核外へのtRNAの輸送に関与する変異株を得るために、ジフテリア毒素のナンセンス変異遺伝子とそれを抑制するサプレッサ-tRNAとを組み合わせた新しい選択系も開発中である。
期刊论文(10)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Kenji Kohno: "The promoter region of the yeast KAR2(BiP)gene contains a regulatory domain that responds to the presence of unfolded proteins in the endoplasmic reticulum."
Kenji Kohno：“酵母 KAR2(BiP) 基因的启动子区域包含一个调节域，可以响应内质网中未折叠蛋白质的存在。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Masao Tokunaga: "Purification and characterization of BiP/KAR2 protein from Saccharomyces cerevisiae."
Masao Tokunaga：“酿酒酵母 BiP/KAR2 蛋白的纯化和表征。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Takuya Shimatomo: "Expression and functional analyses of a novel Drosophila DNA repair gene homologous to Xeroderma pigmentosum complementing gene."
Takuy​​a Shimatomo：“与着色性干皮病互补基因同源的新型果蝇 DNA 修复基因的表达和功能分析。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Mitsuru Kido: "Targeted introduction of a diphtheria toxinーresistant point mutation into the chromosomal EFー2 locus by in vivo homologous recombination." Cell Struct.Funct.16. 447-453 (1991)
Mitsuru Kido：“通过体内同源重组将白喉毒素抗性点突变引入染色体 EF-2 位点。”Cell Struct.Funct.16 (1991)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
視線移動を伴う顔画像処理機構のサル下側頭葉多点電極記録による研究
  • 批准号：
    22K07331
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 资助金额：
    $2.66万
  • 财政年份：
    2022
  • 负责人：
    河野 憲二
  • 依托单位：
    Dokkyo Medical University
哺乳動物小胞体ストレス応答の分子機構の解明
  • 批准号：
    24248019
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
  • 资助金额：
    $12.23万
  • 财政年份：
    2012
  • 负责人：
    河野 憲二
  • 依托单位：
    Nara Institute of Science and Technology
TRECK肝炎モデルマウスを用いたヒト肝機能をもつマウスの作製
  • 批准号：
    19650107
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $2.11万
  • 财政年份：
    2007
  • 负责人：
    河野 憲二
  • 依托单位：
    Nara Institute of Science and Technology
高次脳機能による感覚から運動への情報変換の修飾
  • 批准号：
    16100004
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
  • 资助金额：
    $29.37万
  • 财政年份：
    2004
  • 负责人：
    河野 憲二
  • 依托单位：
    Kyoto University
海外基金