分泌型TLR4および細胞内TLR4によるLPSのパターン認識機構の解析

分泌型TLR4和细胞内TLR4的LPS模式识别机制分析

• 批准号: 14657067
• 负责人: 吉開 泰信
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657067/
• 关键词: TLR-4; 可溶性; 樹状細胞; IL-12; MCP-1

1.可溶性TLR4 (sTLR4) cDNAをHis-tagを含む大腸菌用発現ベクターに組み込み、トランスフォームさせた大腸菌を大量培養した後、吸着カラムによる精製を行った。また哺乳動物細胞(CHO-K1細胞)の大量培養からのsTLR4の精製を行った。NFーκBレポータープラスミドをtransfectしたマウスマクロファージ細胞株RAW264.7細胞を用いて、上で精製したsTLR4による前処置が、LPS刺激によるNF-κB活性化およびTNFα分泌におよぼす効果を解析した結果、量依存性に有意に抑制することがわかった。2.Th1タイプ優位のC5 7BL/6マウスの樹状細胞(dendritic cell : DC)とTh2タイプ優位のBALB/cマウスのDCのTh1/Th2関連のサイトカイン産生能の差の原因を探るために、脾臓DCのToll-like receptor(TLR)mRNAの発現、さらにそれらのリガンドである各種菌体成分に対するサイトカイン産生能を比較検討した。その結果C57BL/6のDCはBALB/cに比べて、TLR-9mRNAの発現が高く、TLR-2,4,6 mRNAの発現は低かった。TLR-4のリガンドである合成リピドA, TLR-2リガンドの合成リポ蛋白、TLR-2/6に認識されると考えられているザイモザン、およびTLR-9のリガンドであるCpG(細菌DNA)に対して、C57BL/6由来のDCは高いレベルのIL-12P40の産生を示したが、合成リピドA,合成リポ蛋白、およびTLR-9のリガンドであるCpG(細菌DNA)に対して、BALB/c由来のDcはMCP-1の産生が有意に高かった。以上の結果から、C57BL/6マウスとBALB/cマウスの感染抵抗性の差の要因として、DCのTLRを介するシグナル伝達の違いによるサイトカインの産生能の差が考えられる。

1. Soluble TLR4 (sTLR4) cDNA contains His-tag for Escherichia coli development, purification, and purification. Mass culture of mammalian cells (CHO-K1 cells) and purification of sTLR4 were performed. NF-κB activation and TNF-α secretion were analyzed before treatment and LPS stimulation in RAW264.7 cells. 2. To explore the reasons for the difference of Th1/Th2-related protein production in dendritic cells (DC) and Th1/Th2-related dendritic cells (DC) at Th1/Th2/Th2/Th1/Th2/Th1/Th2/Th2/Th1/Th2/Th1/Th2/Th The results showed that C57BL/6 mRNA expression was higher than BALB/c mRNA expression and TLR-9mRNA expression was lower than BALB/c mRNA expression. TLR-4 and C57BL/6 have been identified by synthesis of IL-12P40, synthesis of TLR-2 and C57BL/6, synthesis of TLR-2 and C57BL/6. The origin of BALB/c is Dc MCP-1. The results showed that C57BL/6 cells had higher infection resistance than BALB/c cells, and the difference in production energy of DC cells was mainly due to the difference in infection resistance between BALB/c cells and DC cells.

项目成果

Tsuboi, N., et al.: "Roles of toll-like receptors in C-C chemokine production by renal tubular epithelial cells"J.Immunol.. 169. 2026-2033 (2002)

Tsuboi, N., et al.：“Toll 样受体在肾小管上皮细胞产生 C-C 趋化因子中的作用”J.Immunol.. 169. 2026-2033 (2002)

Hasegawa, T et al.: "Toll-like receptor 2 (TLR2) is at least partly involved in anti-tumor activity of glycoprotein from Chlorella vulgaris"Int.Immunopharmac.. 2. 579-589 (2002)

Hasekawa, T 等人：“Toll 样受体 2 (TLR2) 至少部分参与来自小球藻的糖蛋白的抗肿瘤活性”Int.Immunopharmac.. 2. 579-589 (2002)

Shimizu H et al.: "Toll-like receptor 2 contributes to liver injury induced by Salmonella infection through Fas ligand expression on NKT cells in mice"Gastroenterlogy. 123. 1265-1277 (2002)

Shimizu H 等人：“Toll 样受体 2 通过小鼠 NKT 细胞上的 Fas 配体表达，导致沙门氏菌感染诱导的肝损伤”胃肠病学。

Liu, T., et al.: "Differences in expression of Toll-like receptors and their reactivities by dendritic cells between BALB/c and C57 BL/6 mice"Infect. Immun.. 70. 6638-6645 (2002)

Liu, T., et al.：“BALB/c 和 C57 BL/6 小鼠之间树突状细胞的 Toll 样受体表达及其反应性的差异”感染。

Masuda A, et al.: "Th2 cytokine production from Mast cells is directly induced by LPS and distinctly regulated by JNK and P38 pathways"J.Immunol.. 169. 3801-3810 (2002)

Masuda A 等人：“LPS 直接诱导肥大细胞产生 Th2 细胞因子，并受 JNK 和 P38 途径明显调节”J.Immunol.. 169. 3801-3810 (2002)