インターロイキン15を用いた癌免疫療法の開発

使用白细胞介素 15 开发癌症免疫疗法

• 批准号: 12217059
• 负责人: 吉開 泰信
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217059/
• 关键词: IL-15; トランスジェニックマウス; メラノーマ; NK細胞; CD8キラーT細胞; DNAワクチン

IL-15cDNAをMHCクラスIプロモーターと発現ベクターに組み込み、トランスジェニック(Tg)マウスを作製した。このマウスでは脾臓でのメモリー型CD8T細胞数が有意に増加していた。またNK細胞数には差を認めなかったが、YAC-1やMHCクラスI陰性メラノーマB16.44に対して強いNK細胞傷害活性が認められた。IL-15TgマウスにB16.441x10^6を皮下に接種したところ、腫瘍の増殖が著しく抑制された。B16.44接種IL-15Tgマウスに抗asialoGM1抗体を400μgx4回投与で抗腫瘍抑制効果が阻害された。次にIL-15TgマウスにMHCクラスI陽性メラノーマ(B16F10)細胞5x10^4を皮下に接種して、腫瘍増殖曲線を調べたところ、B16.44と同様に強い腫瘍増殖抑制が認められた。B16F10接種10日目の脾臓細胞をさらにマイトマイシン処理B16F10と5日間培養して、B16F10に対する細胞傷害活性を調べたところ、強い細胞傷害活性が認められた。B16F10IL-15Tgマウスに抗CD8抗体を400μgx4回投与で抗腫瘍抑制効果が阻害された。IL-15TgマウスではMHCクラスI陰性メラノーマに対してはNK細胞を、MHCクラスI陽性メラノーマに対してはCD8キラーT細胞の活性化によって抗腫瘍効果を示すことが明かとなった。IL-15cDNAをpEGFP-N1に組み込んだプラスミドpEGFP-N1:IL-15を作成し、gene gunを用いて4μgをマウスに投与して1日、3日、5日目に局所リンパ節細胞を共焦点レーザー顕微鏡で調べてところ、3日目から付着細胞に蛍光が検出された。そこで、BCG感染後、3日毎に3回pCR3.1:IL-15を投与したところ、有意にPPD特異的CD8T細胞の増加が認められた。

IL - 15 cdna を MHC ク ラ ス I プ ロ モ ー タ ー と 発 now ベ ク タ ー に group み 込 み, ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク (Tg) マ ウ ス を cropping し た. The number of <s:1> <s:1> ウスで ウスで in て spleen で <s:1> メモリ メモリ メモリ <s:1> CD8T cells が is intentionally に increased by て て た た た た た. Poor ま た NK cell count に は を recognize め な か っ た が や, YAC - 1 MHC ク ラ ス I negative メ ラ ノ ー マ B16.44 に し seaborne て strong い damage activity of NK cells が recognize め ら れ た. IL - 15 tg マ ウ ス に B16.441 x10 ^ 6 を subcutaneous に vaccination し た と こ ろ, swollen sores の が with good colonization し く inhibit さ れ た. B16.44 inoculation of IL-15Tg ウスに anti-asialogm1 antibody を400μgx4 reinjection and で anti-swelling inhibitory effect が inhibition された. Time に IL - 15 tg マ ウ ス に MHC ク ラ ス I positive メ ラ ノ ー マ (B16F10) cell 5 x10 ^ 4 を subcutaneous に vaccination し て, swollen sores raised yield curve を べ た と こ ろ, B16.44 と with others in strong に い swollen sores raised colonization inhibit が recognize め ら れ た. B16F10 vaccination 10 mesh の splenic cells を さ ら に マ イ ト マ イ シ ン 処 Richard B16F10 と 5 day training し て, B16F10 に す seaborne cell damage activity を adjustment る べ た と こ ろ cell damage activity, strong い が recognize め ら れ た. B16F10IL-15Tg を ウスに anti-CD8 antibody を400μgx4 reinfusion and で anti-tumor inhibitory effect が inhibition された. IL - 15 tg マ ウ ス で は MHC ク ラ ス I negative メ ラ ノ ー マ に し seaborne て は NK cell を, MHC ク ラ ス I positive メ ラ ノ ー マ に し seaborne て は CD8 キ ラ ー t-cell の activeness に よ っ て resistance swollen sores unseen fruit を shown す こ と が Ming か と な っ た. IL - 15 cdna を pEGFP - N1 に group み 込 ん だ プ ラ ス ミ ド pEGFP - N1: IL - 15 を make し, gene Gnu を with い て 4 mu g を マ ウ ス に cast with し て 1, 3, 5 eyes に bureau リ ン パ ganglion cells を total focus レ ー ザ ー 顕 micromirror で adjustable べ て と こ ろ, 3 eyes か ら pay the cell に 蛍 light が 検 out さ れ た. そ こ で, BCG, 3 days after infection in their に 3 back pCR3.1: IL - 15 を cast with し た と こ ろ, intentionally に PPD specific CD8T cells の raised plus が recognize め ら れ た.

项目成果

Umemura,M.: "Overexpression of IL-15 in vivo induces a predominant Tcl response in mice inoculated with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guerin infection."J.Immunol.. in press.. (2001)

Umemura,M.：“体内 IL-15 的过度表达会在接种牛分枝杆菌卡介苗感染的小鼠中诱导主要的 Tcl 反应。”J.Immunol.. 新闻中.. (2001)

Masuda,A.: "Interleukin-15 induces rapid tyrosine phosphorylation of STAT6 and the expression of interleukin-4 in mouse mast cells."J.Biol.Chem.. 275. 29331-29337 (2000)

Masuda,A.：“Interleukin-15 诱导小鼠肥大细胞中 STAT6 的快速酪氨酸磷酸化和 IL-4 的表达。”J.Biol.Chem.. 275. 29331-29337 (2000)

Umemura,M.: "Impaired IL-15 production in murine AIDS mice might uderlie susceptibility to mycobacterial infection."J.Leuko.Biol.. 69. 138-148 (2001)

Umemura,M.：“小鼠 AIDS 小鼠 IL-15 产生受损可能导致对分枝杆菌感染的易感性。”J.Leuko.Biol.. 69. 138-148 (2001)

Yajima,T.: "Memory phenotype CD8^+T cells increased in IL-15 transgenic mice are involved in early protection against a primary infection with Listeria monocytogenes."Eur.J.Immunol.. (in press.). (2001)

Yajima,T.：“IL-15 转基因小鼠中记忆表型 CD8^ T 细胞增加参与了针对单核细胞增生李斯特氏菌原发感染的早期保护。”Eur.J.Immunol..（正在出版）。

Kimura,K.: "Synergistic effect of IL-15 and IL-12 on anti-tumor activity in a murine malignant pleurisy model."Cancer.Immunol.Immunother.. 49. 71-77 (2000)

Kimura,K.：“IL-15 和 IL-12 对小鼠恶性胸膜炎模型抗肿瘤活性的协同作用。”Cancer.Immunol.Immunother.. 49. 71-77 (2000)