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非天然型DNA2重らせんの創成

非天然 DNA 双螺旋的创建

基本信息

批准号：
15651091
负责人：
関根光雄
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、天然のDNA鎖に対してハイブリダイゼーションすることによって非W-C型DNA2重らせんを構築できる人工DNAを設計・合成し、新しい遺伝子診断やDNAプローブ等に活用することを目的とした基礎研究である。この新型DNA2重らせんをとることのできる人工DNAは、核酸塩基のアミノ基にアシル型の置換基を導入することによって、これまでにあり得なかった塩基対を形成させることのできるように工夫されたものである。この研究を可能にしたのは、これまで、塩基部位のアミノ基にアシル基を導入させたDNAが極めて合成が困難であったが、最近我々はこのようなN-アシル型DNAを積極的に合成する基礎研究を展開し、初めて実現することに成功した。今回、この予備的研究成果は、次世代の遺伝子診断法あるいはmRNA検出法などの新しい強力なツールにもなり得るものと予想されることから、このようなN-アシル型人工DNAの合成とそのDNA診断技術への展開を図った。まず、本年度はN-アシル化されたDNAの合成法の確立を第一の目標として研究を進めた。N-アシル化されたDNAは塩基性条件で不安定で、アシル基が脱離してしまうため、中性条件で合成できる合成法を検討した。中性条件で除去できるスペーサーとしてこれまで我々のグループが予備的に開発してきたシランジイル型のスペーサーをN-アシル化されたDNAの3'末端のデオキシヌクレオシドの3'末端水酸基に導入することを検討した。その結果この導入反応は従来60%程度の効率であったが、これを定量的なレベルまで向上させることに成功した。さらに、スペーサーが導入された3'-末端デオキシヌクレオシドと固相担体を連結する反応の効率も向上させることに成功した。これらの研究成果を今後化学量論的N-アシルDNAの合成の応用を検討している。

This study focuses on the design, synthesis, and utilization of natural DNA locks, non-W-C DNA duplex, and DNA diagnostics. The new DNA gene was introduced into the genome. This research has been successful in the introduction of N-type DNA into the genome. In this paper, the research results prepared in the present and future generations of gene diagnosis methods, such as mRNA detection methods, new and powerful methods, and the development of N-type artificial DNA synthesis and DNA diagnosis techniques. This year, the establishment of the first N-type DNA synthesis method was carried out. The synthesis methods of N-ASCII DNA are discussed, such as the instability of basic conditions, the separation of ASCII bases, and the synthesis under neutral conditions. The neutral condition is to remove the DNA from the 3 '-terminal amino acid group of the DNA and to prepare the DNA for the N-terminal amino acid group of the DNA. The results of the introduction of anti-corruption to 60% of the efficiency, quantitative and upward success In addition, the introduction of the 3'-terminal phase is successful. The results of this research will be discussed in the future.