ユ-イング肉腫発症の原因遺伝子の同定とクロ-ニング

尤文氏肉瘤发生基因的鉴定和克隆

基本信息

批准号：
03265216
负责人：
清水信義
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ユ-イング肉腫(Ewing's Sarcoma;ES)および末梢神経上皮腫(Peripheral Neuroepitheliom;PNE)では、すべての症例で染色体相互転座t(11;22)(q24;q12)が見られるので、第11まだは第22染色体の切断部位に未知のがん遺伝子が存在し転座によって活性化することが原因と考えられる。本研究ではこの未知がん遺伝子のクロ-ニングを行ない、切断点近傍の詳細な物理的地図を作成することを目的とした。すでに我々はセルソ-タ-を用いて高分解能のフロ-カリオタイプを作成し、任意の染色体を高純度でソ-ティングする技術を確立している。今回、SCCHー196、RDーES、NCRーEW2細胞株のフロ-カリオタイピングを行った。その結果、SCCHー196細胞は約36時間の倍化時間を示して比較的増殖がよく、20画分の良好なフロ-カリオタイプが得られた。ソ-ティングした各々の画分の染色体に第11・第22染色体のDNAマ-カ-をハイブリダイズした結果、転座染色体11q+(11ptetーq24::22q12ーqter)および22qー(22pterーq12::11q24ーqter)は、正常の第11・第22染色体と異なる画分にソ-ティングされることが明らかになった。さらに、D22S1マ-カ-は22qー染色体にハイブリダイズし11q+にはハイブリダイズしなかった。一方D22S15マ-カ-では逆の結果を示した。従って、ESおよびPNEの転座の切断点は両マ-カ-の間1.2cM内に位置すると限定された。また、第22染色体のNotIリンキングクロ-ンを多数分離した。さらに、コスミドライブラリ-も作成中である。今後これらのクロ-ンを用いて、マ-カ-S1とS15の間およびその前後のNotI制限酵素地図を作成し、隣接するNotI断片上のコスミドを分離して切断点に迫る予定である。

在Ewing的肉瘤（ES）和周围神经上皮（PNE）中，在所有情况下都可以看到染色体相互易位t（11; 22）（Q24; Q12），因此认为这是由于在22号染色体中的cleac癌基因的存在而被认为是由未知的癌症基因的存在引起的。这项研究旨在克隆这个未知的癌症基因，并为断点附近创建详细的物理图。我们已经建立了一项技术，可以使用大提琴器创建高分辨率流量类型，并以高纯度浸泡任何染色体。这次，我们在SCCH-196，RD-ES和NCR-EW2细胞系上进行了拼球。结果，SCCH-196细胞的两倍时间约为36小时，并且相对增殖，从而导致20个良好的流量量型。将染色体11和22的DNA标记物杂交到每个播种分数的染色体表明，易位的染色体11q+（11ptet-Q24 :: 22q12-qter）和22q-（22pter-q12 ::::: 11 q11q24-qter）与裂缝播种，与正常的chr术不同。杂交与22q-chromosoms，而不是11q+。另一方面，D22S15标记显示了相反的结果。因此，ES和PNE易位的断点仅限于两个模具之间的1.2 cm之内。此外，分离了许多在22号染色体上的Noti链接闭合。此外，目前正在建设宇宙库。这些克隆将用于在MACA-S1和S15之间和之后创建NOTI限制的地图，并在相邻的Noti片段上分离宇宙，以更接近断点。