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細胞増殖シグナル伝達に関わる80K蛋白遺伝子の構造解析と転写制御

参与细胞增殖信号转导的80K蛋白基因的结构分析和转录调控

基本信息

批准号：
04152113
负责人：
清水信義
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

増殖因子によって膜レセプターのチロシンキナーゼを介するシグナル伝達系が活性化されると、PI代謝回転の促進、PKCの活性化、80K蛋白のリン酸化などが観察され、続いてc-fos、-junなどの転写が促進されその産物がさらに別の遺伝子の転写促進に関与する。従って80K蛋白はシグナル伝達系と転写制御系の間の重要な蛋白質と推定される。我々はこの80K蛋白を精製して2つの分子種(80K-H/-L)を見出しそのcDNAを各々クローニングして塩基配列を決定した。80K-L遺伝子の発現は特に脳・神経組織で高く神経のシグナル伝達にも重要な役割を果していると考えられ、両遺伝子の発現パターンも組織によって異なるので2種の蛋白質は役割分担していると思われる。一方ソーティングした染色体を用いて80K-H遺伝子を第19染色体に、80K-L遺伝子は第6染色体にマップした。80K-Lの場合cDNAの3'非翻訳領域をプローブニすると第21染色体にもシグナルが検出され相同配列の存在が示唆されたが、この領域は牛MARCKScDNAでも翻訳領域以上に保存在性が高い領域てあり、mRNAの安定化など何らかの機能を担っていると推測される。改変型MTプロモーターによる発現抑制に関しては安定な形質転換体ではZn^<2+>による誘導がみられず改良を加えている。さらにアンチセンスの恒常的発現ベクターも作製したのでその導入を計画中である。一方アンチセンス発現ベクターの受容細胞株として、Ca-9-22細胞からEGF抵抗性のCRE-1、TPA抵抗性のCaT、さらにTPA・EGF二重抵抗性の変異株1B6、13A5を単離した。また部分ペプチドを作製し抗80K-L抗体の調製を試みたが力価の高い抗体が得られず、Bacurovirusにより発現系の構築を試みている。さらに80K-L蛋白の機能と構造の関係を調べるため、部位特異的変異導入によって、非ミリスチン酸化変異遺伝子、非リン酸化変異遺伝子、各種欠失変異遺伝子の作製を進めている。

Propagation factor of the film of the film Activation of 伝达行されると, promotion of PI metabolism recovery, activation of PKC, 80 K protein のリン acidification などが観泽され、続いてc-fos、-junなどの転WRITING が PROMOTION されそのproduct がさらにbieの缝子の転WRITING promotes に关与する.従って80K protein はシグナル伝大组と転WRits the imperial system の间のimportant protein and presumed される. Our 80K protein is a refined molecular species (80K-H/-L) and the cDNA is determined based on the base alignment. 80K-L The legacy of the legacy of the child is the most important thing.えられ、両伝子の発成パターンもorganized によってdifferent なるので 2 kinds of のprotein はServant sharing していると思われる. One side's chromosomes are 80K-H, which is the 19th chromosome, and 80K-L, which is the 6th chromosome. 80K-L's cDNA's 3' non-translation field をプローブニすると No. 21 The existence of the same arrangement of chromosomes and the existence of the chromosomes are the same as the chromosomes. Domain は cow MARCKScDNA is translated into the domain and is preserved in the high-quality domain てあり, and the stabilization of the mRNA などらかのfunctional を倣ていると speculates される. Modified MT プロモーターによる発appears to suppress the に关しては stabilization なmorphological 転Body changer Zn^<2+>による induced がみられず improved を加えている.さらにアンチセンスの constant 発行ベクターもproduced したのでその Imported をPlanned である. One party's アンチセンス発成ベクターのaccepted cell line として, Ca-9-22 cells からEGF-resistant のCRE- 1. TPA-resistant のCaT, さらにTPA・EGF dual-resistant の変iso strain 1B6, 13A5 を単里した.またpart of the ペプチドをproduced しanti-80K-L antibody のmodulation をtest みたが力価の高いantibody が got られず, Bacurovirus により発行のconstruct をtest みている. The relationship between function and structure of さらに80K-L protein, べるため, site-specific mutation introduction, によって, non-ミリスチン acidified 変変伝伝子, non-リン acidified 変変伝伝子, and all kinds of リスチン acidified 変変伝伝子.