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細胞増殖シグナル伝達に関わる80K蛋白遺伝子の構造解析と転写制御

参与细胞增殖信号转导的80K蛋白基因的结构分析和转录调控

基本信息

批准号：
04152113
负责人：
清水信義
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

増殖因子によって膜レセプターのチロシンキナーゼを介するシグナル伝達系が活性化されると、PI代謝回転の促進、PKCの活性化、80K蛋白のリン酸化などが観察され、続いてc-fos、-junなどの転写が促進されその産物がさらに別の遺伝子の転写促進に関与する。従って80K蛋白はシグナル伝達系と転写制御系の間の重要な蛋白質と推定される。我々はこの80K蛋白を精製して2つの分子種(80K-H/-L)を見出しそのcDNAを各々クローニングして塩基配列を決定した。80K-L遺伝子の発現は特に脳・神経組織で高く神経のシグナル伝達にも重要な役割を果していると考えられ、両遺伝子の発現パターンも組織によって異なるので2種の蛋白質は役割分担していると思われる。一方ソーティングした染色体を用いて80K-H遺伝子を第19染色体に、80K-L遺伝子は第6染色体にマップした。80K-Lの場合cDNAの3'非翻訳領域をプローブニすると第21染色体にもシグナルが検出され相同配列の存在が示唆されたが、この領域は牛MARCKScDNAでも翻訳領域以上に保存在性が高い領域てあり、mRNAの安定化など何らかの機能を担っていると推測される。改変型MTプロモーターによる発現抑制に関しては安定な形質転換体ではZn^<2+>による誘導がみられず改良を加えている。さらにアンチセンスの恒常的発現ベクターも作製したのでその導入を計画中である。一方アンチセンス発現ベクターの受容細胞株として、Ca-9-22細胞からEGF抵抗性のCRE-1、TPA抵抗性のCaT、さらにTPA・EGF二重抵抗性の変異株1B6、13A5を単離した。また部分ペプチドを作製し抗80K-L抗体の調製を試みたが力価の高い抗体が得られず、Bacurovirusにより発現系の構築を試みている。さらに80K-L蛋白の機能と構造の関係を調べるため、部位特異的変異導入によって、非ミリスチン酸化変異遺伝子、非リン酸化変異遺伝子、各種欠失変異遺伝子の作製を進めている。

Promoter factors are involved in the activation of protein expression systems, the promotion of PI metabolism, the activation of PKC, the detection of 80K protein acidification, the promotion of c-fos, -jun protein production, and the promotion of the production of different genes. 80K protein is a putative protein that plays an important role in gene expression and gene regulation. The 80K protein was purified and 2 molecular species (80K-H/-L) were identified. 80K-L protein development in the brain tissue, high levels of brain tissue, high levels of protein development, high levels of protein development, high levels of protein The 80K-H gene was used for chromosome 19 and the 80K-L gene for chromosome 6. 80K-L case cDNA 3'non-inverted domain is located on chromosome 21, and the same sequence exists in this domain. MARCKScDNA is located above the inverted domain, and the gene is preserved in the high domain, and the function of mRNA stabilization is predicted. The change of MT is related to the stability and quality of the body. The change of MT is related to the improvement of MT. In the meantime, the constant occurrence of the phenomenon of loss and damage is under way. One of the three cell lines, Ca-9-22, CRE-1, CaT, TPA and EGF resistant mutants, 1B6 and 13A5, were isolated. Part of the preparation of anti-80K-L antibody modulation, test of high antibody production, Bacterovirus development system construction The relationship between function and structure of 80K-L protein is regulated, site-specific variant introduction, non-specific variant introduction, and various variant introduction.