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増殖因子受容体を標的とする新しいDDSの開発と実用化の試み

靶向生长因子受体的新型DDS的开发及实际应用

基本信息

批准号：
03557053
负责人：
清水信義
金额：
$ 10.82万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はこれまでに、EGFレセプター(EGFR)に対するモノクローナル抗体B4G7と毒性蛋白質Geloninの接合体が、イムノトキシンとして扁平上皮癌細胞のターゲット療法に有効であることを示してきた。今回、このB4G7抗体にポリリジンを接合し、さらに遺伝子DNAをアフィニテイー結合させた複合体“イムノジーン"を用いて、EGFRを介する遺伝子導入と細胞内での発現に成功した。モノクローナル抗体B4G7とポリリジンは、それぞれSPDPおよびイミノチオレインで活性化しジスルフィド結合させて接合体を作製した。この接合体は遺伝子DNA(CAT:クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ)と定量的にアフィニティー結合して抗体/DNA複合体を形成した。この複合体で癌細胞NAを24時間処理すると、CAT-DNAはEGFレセプターと結合しエンドサイトーシスによって細胞内に導入された。その結果、導入12時間後に細胞のCAT活性が観察され72時間まで上昇し続けた。CAT遺伝子の導入と発現は複合体に特異的で、抗体・ポリリジン・DNAの混合物では起らなかった。モノクローナル抗体B4G7を利用する本遺伝子導入法は、カルシウム共沈法やエレクトロポレーション法と異なり、ほとんど細胞に損傷を与えない。また、EGFRを発現する細胞のみに特異的に遺伝子を導入することができる。さらに、ウイルスを利用する遺伝子導入法に付随するウイルスゲノムの持込みも皆無なので、極めて理想的な方法である。今後は、癌抑制遺伝子やアンチセンス遺伝子などの発現、さらにヘルペスウイルスチロシンキナーゼとガンシクロビルの併用による殺細胞効果を検討し、臨床応用への可能性を探る。

I 々はこれまでに, EGF レセプター (EGFR) にす seaborne るモノクローナル antibody B4G7 と toxicity protein Gelonin の gametes が, イムノトキシンとして squamous cell cancer のターゲッにト therapy have a sharper であることを shown してきた. Today, back この B4G7 antibody にポリリジンを joint し, さらに heritage 伝 child DNA をアフィニテイー combining させた complex "イムノジーン" を with いて, EGFR を dielectric する heritage 伝 son import と intracellular での発にし success now た. モノクローナル antibody B4G7 とポリリジンは, それぞれ SPDP およびイミノチオレインで activeness しジスルフィド combining させて gametes を cropping した. この gametes は posthumous son 伝 DNA (CAT: クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ) と quantitative にアフィニティー combining して antibody/DNA complex を form した. この complex で cancer NA を 24 time 処すると, CAT - DNA は EGF レセプターと combining しエンドサイトーシスによって in cells に import された. Youdaoplaceholder0 そ results: After 12 hours of introduction, the <s:1> CAT activity of に cells が観 observed that after され72 hours, まで increased 続けた続けた. The CAT offspring 伝 offspring <s:1> are introduced into と, resulting in a に specific で, antibody-ポリリジ <e:1>, and DNA <e:1> mixture でった, which then らならなったった. モノクローナル antibody B4G7 を using する this heritage 伝は import method, カルシウム shen total method やエレクトロポレーション method と different なり, ほとんをにど cell injury and えない. また, EGFR を発 now する cells のみにに of specific 伝 son を import することができる. さらに, ウイルスを using する posthumous son 伝に pay import method with するウイルスゲノムの hold 込みも nix なので, extremely めてな method of ideal である. Future は, cancer inhibition but 伝やアンチセンス posthumous son 伝などの発 now, さらにヘルペスウイルスチロシンキナーゼとガンシクロビルの and による kill cells working fruit を beg し検, clinical 応への possibility をる.