权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

増殖因子受容体を標的とする新しいDDSの開発と実用化の試み

靶向生长因子受体的新型DDS的开发及实际应用

基本信息

批准号：
03557053
负责人：
清水信義
金额：
$ 10.82万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はこれまでに、EGFレセプター(EGFR)に対するモノクローナル抗体B4G7と毒性蛋白質Geloninの接合体が、イムノトキシンとして扁平上皮癌細胞のターゲット療法に有効であることを示してきた。今回、このB4G7抗体にポリリジンを接合し、さらに遺伝子DNAをアフィニテイー結合させた複合体“イムノジーン"を用いて、EGFRを介する遺伝子導入と細胞内での発現に成功した。モノクローナル抗体B4G7とポリリジンは、それぞれSPDPおよびイミノチオレインで活性化しジスルフィド結合させて接合体を作製した。この接合体は遺伝子DNA(CAT:クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ)と定量的にアフィニティー結合して抗体/DNA複合体を形成した。この複合体で癌細胞NAを24時間処理すると、CAT-DNAはEGFレセプターと結合しエンドサイトーシスによって細胞内に導入された。その結果、導入12時間後に細胞のCAT活性が観察され72時間まで上昇し続けた。CAT遺伝子の導入と発現は複合体に特異的で、抗体・ポリリジン・DNAの混合物では起らなかった。モノクローナル抗体B4G7を利用する本遺伝子導入法は、カルシウム共沈法やエレクトロポレーション法と異なり、ほとんど細胞に損傷を与えない。また、EGFRを発現する細胞のみに特異的に遺伝子を導入することができる。さらに、ウイルスを利用する遺伝子導入法に付随するウイルスゲノムの持込みも皆無なので、極めて理想的な方法である。今後は、癌抑制遺伝子やアンチセンス遺伝子などの発現、さらにヘルペスウイルスチロシンキナーゼとガンシクロビルの併用による殺細胞効果を検討し、臨床応用への可能性を探る。

We have shown that EGF and EGFR are effective in the treatment of squamous epithelial carcinoma cells. Now, B4G7 antibody is successfully introduced into cells. The antibody B4G7 is activated by SPDP and its conjugate is prepared. The conjugate is a DNA fragment (CAT) and a quantitative antibody/DNA complex. The complex was introduced into cancer cells after 24 hours of treatment, and CAT-DNA was incorporated into the cells. The CAT activity of the cells increased after 12 hours and increased after 72 hours. CAT gene introduction and development complex specific, antibody, protein and DNA mixture The use of B4G7 in cell injury and cell injury is discussed in detail. The expression of EGFR in the cells is characterized by the introduction of EGFR into the cells. In addition, the gene introduction method that utilizes the gene is an ideal method that allows the gene to be used without any difficulty. In the future, we will explore the possibility of the development, clinical application and combination of cytocidal effects of cancer suppressor gene and tumor suppressor gene.