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抗体を利用した生体内遺伝子ターゲッティング法の開発と癌遺伝子治療への応用

使用抗体的体内基因靶向方法的开发及其在癌症基因治疗中的应用

基本信息

批准号：
06282257
负责人：
清水信義
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.イムノジーンの作製本研究で用いたモノクローナル抗体B4G7は、ヒトEGFレセプター(EGFR)を認識し、EGFRとともにエンドサイトーシスされる。チオエーテル結合で架橋した抗体/ポリリジン複合体「イムノポーター」は、ジスルフィド結合による複合体よりも安定で、高い遺伝子導入効率が得られた。また、イムノジーン法において、抗体・ポリリジン・DNAの量比を至適範囲に保つことが重要であった。2.イムノジーンによる遺伝子導入遺伝子導入効率の指標として、β-Gal遺伝子を運ぶイムノジーンを作製し、EGFRを過剰産生するA431細胞の培養液に添加した。5日以上にわたりX-gal染色される発現細胞数の上昇がみられた。またクロロキンで細胞を処理するとイムノジーン法による遺伝子導入効率が上昇した。さらに、毒性はないがエンドソームから細胞質への移行能は保持した変異型ジフテリア毒素を共存させて作製したイムノジーン・ジフテリア毒素複合体を用いると飛躍的な遺伝子導入効率の上昇が観察された。したがって、イムノジーンがエンドサイトーシス系を介し遺伝子を導入すること、また、リソソーム活性および細胞質への移行の制御が、遺伝子導入効率の上昇に重要であることが示唆された。3.イムノジーンの癌治療への応用の試みヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼ(TK)遺伝子を発現するプラスミドを運ぶイムノジーンを作製し、EGFRを過剰産生する扁平上皮癌細胞(A431およびNA)培養に添加後、ガンシクロビルで処理した。イムノジーンを添加した細胞では、ガンシクロビル依存的な殺細胞効果が観察された。本イムノジーン法は生体内の特定細胞へのターゲッティングが可能な遺伝子導入法で将来の遺伝子治療には不可欠の技術である。組織特異的なプロモーターの利用などとあわせて生体系での効果を評価するために担癌マウスでの実験を進めている。

1. The antibodies B4G7 and EG used in this study were produced by イムノジーンのでたモノクローナルFレセプター(EGFR)をKnowingし,EGFRとともにエンドサイトーシスされる.チオエーテル conjugated bridging antibody/ポリリジン complex "イムノポーター"は, The ジスルフィド combined with the による complex よりも is stable and has a high い缝子 introduction efficiency and is made of られた.また, イムノジーン法において, antibody・ポリリジン・DNA のquantitative ratio を to the appropriate range 囲に宝つことがimportant であった. 2. Indicators of イムノジーンによる伝子 Import 伝子 Import efficiency として、β-Gal 伝子をThe culture medium of A431 cells produced by transporting EGFR was added to the culture medium. After 5 days of X-gal staining, the number of cells increased and the number of cells increased. The efficiency of cell introduction has been improved through the use of cell processing technology.さらに、toxicity はないがエンドソームからcytoplasm へのmigratory ability はmaintenance した変 heterotype ジフテリアtoxic をcoexistence させてTo produce the Toxin Complex・ジフテリアToxin Complex, the introduction efficiency of the Neko that has leapt through has been improved.したがって、イムノジーンがエンドサイトーシス System を中し缝子を Import すること、また、リソソIt is important to control the activity of the cytoplasm, control the migration, and increase the efficiency of the incorporation of postpartum. 3. The origin of the cancer treatment testのチミジンキナーゼ(TK)伝子を発行するプラスミドを云ぶイAfter the EGFR-produced squamous epithelial cancer cells (A431 NA) were cultured and added, EGFR was processed.イムノジーンをAdded したcell では, ガンシクロビルな榳看された which depends on the cell killing effect. This method is an indispensable technique for introducing specific cells into the body's body and is a possible future treatment method. Tissue-specific なプロモーターの utilizing the などとあわせて生SYSTEMの Effect を価するために聞ウスでの実験を入めている.