転写因子E2F-1が染色体DNA複製開始を誘導する機構の分子解析

转录因子E2F-1诱导染色体DNA复制起始机制的分子分析

• 批准号: 09266213
• 负责人: 加藤 順也
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09266213/
• 关键词: E2F; サイクリンE; Cdk2; DNA複製; MCM; 細胞周期

転写因子E2Fが染色体DNA複製開始を誘導する機構を二つの系を用いて解析した。(1)哺乳類培養細胞系を用いた解析 マウス線維芽細胞株NIH3T3にメタロチオネインプロモーターと連結したヒトE2F-1cDNAを導入し、亜鉛を培地に添加することによりE2F-1の発現を誘導できる細胞株を樹立した。この細胞を低血清培地にて休止期に同調させ、E2F-1の発現誘導により細胞がS期へと進行する過程を詳細に検討した結果、E2F-1の下流には、サイクリンEの発現によるCdk2の活性化とDNA複製開始装置の構成因子であるMCMの染色体への結合を促進する過程の、少なくとも、二つの経路が律速段階として存在することを明らかにした。(2)アフリカツメガエル卵を用いた解析 われわれは昨年度までに、アフリカツメガエルの未成熟卵を用いてDNA複製開始を検定できる系を構築していたので、これを用いてE2FとCdk2活性の関与を解析した。その結果、カエル卵においては、E2F活性のみでは不十分であるが、サイクリンE/Cdk2複合体と協調するとDNA複製開始が誘導できること、この系においてはサイクリンEの発現はE2Fに依存しないこと、さらにはE2Fの標的遺伝子にサイクリンE以外のものが存在することを明らかにした。カエル卵においては、ほとんどの蛋白質の発現はすでに存在しているmRNAのpolyA付加により制御されることが知られているので、外部から導入した転写因子により活性化された遺伝子を同定するには理想的な系である。この利点を生かし、ディファレンシャルディスプレイ法を用いてE2Fにより発現が特異的に上昇する遺伝子の断片を4種類同定した(仮称 CET-1、-2、-3、-4)。このうち比較的強く誘導された遺伝子断片(CET-1と2)をクローニングし、現在、完全長のcDNAを単離し、解析中である。

Writing factor E2F chromosomal DNA replication begins to direct the two-year system to analyze the DNA sequence by means of genetic analysis. (1) the cell lines of mammalian cultures were analyzed by using the NIH3T3 cell line. The cell lines were linked, the E2F-1cDNA was introduced, the E2F-1 was added, and the cell lines were isolated. During the rest period of low-serum incubation, the same cycle was detected in the rest period, and E2F-1 was used to guide the cell cycle in the S phase. The results of the experiment, the results of the low-level cell culture, the activation of Cdk2, the initiation of DNA replication, and the combination of MCM chromosomal analysis to promote the induction of the process, the reduction of DNA sequence, the activation of DNA replication, the initiation of DNA replication. There is a gap in the speed section of the second railway line. (2) during the last year, the DNA copy of immature eggs was used to analyze the activity of E2F and E2F. Results: the results show that the E2F activity is not very sensitive, that the E/Cdk2 complex coordination DNA copy starts, and that the E2F dependencies are known to exist in addition to the E2F dependencies and E2F clusters. In this paper, we can see that there is an ideal system in which you know that there is an ideal system in which you know that you have a problem, that is, you need to know that you have a problem, and that there is a problem in the system that you know that there is a problem. In order to improve the quality of the system, the method is based on the use of the E2F device to detect the special characteristics of the upper part of the device. The same type of fragment (known as CET-1,-2,-3,-4). The current, full-length cDNA is isolated, and the resolution is in progress.