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金属プロテアーゼの構造と触媒機構の解析

金属プロテアーゼの構造と触媒機構の解析
金属蛋白酶的结构及催化机制分析
批准号：
04225226
负责人：
岩永 貞昭
金额：
$0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1992 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04225226/
关键词：
金属プロテアーゼ合成ペプチド基質クサリ蛇毒出血因子血栓性因子サーモライシン一次構造エンドプロテアーゼ

项目摘要

项目成果

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本研究では、本属プロテアーゼの中で比較的精製が容易で、かつ大量に分離が可能な蛇毒亜鉛プロテアーゼをとりあげ、このエンドプロテアーゼの構造と觸媒活性基を明らかにすることを目的としている。具体的には、このプロテアーゼの基質と阻害剤を開発し、活性部位残基を同定し、結晶のX線回析による立体構造の解明を通して、酵素活性部位のミクロ環境を明白にする。本年度は、主に基質の開発に焦点を絞って進めた。ハブ毒の出血性、非出血性の金属プロテアーゼ及びPussell's viper毒の凝固X因子活性化酵素(RVV-X)は、サーモライシンや哺乳類コラゲナーゼなどとは一次構造上相同性などのアミノ酸配列をペプチド領域内にもつ分子内蛍光消光基質(蛍光基にアミノベンゾイル基(Abz)、消光基にジニトロベンジルアミド基(Dna)をもつ)を10年合成し、その有用性を検討した。その結果、これらペプチド合成基質を用いた蛇毒金属プロテアーゼの高感度かつ簡便なアッセイ法を確立できた。フィブリノーゲン切断部位周渡配列を含むAbz-Ser-Pro-Met-Leu-Dnaは、ハブ毒出血因子(HR1A及びHR2a)によっても最も高いkcat/km値で切断されたが(切断部位はPro-Met)、サーモライシンはこの基質に対して、約1/30の活性しか示しなかった。マムシ科・クサリヘビ科の蛇の粗毒(7種)もこの基質を強く水解し、この活性はEDTAによって完全に阻害された。一方、RVV-XはP_1位にArgを好み、Abz-Gly-Phe-Arg-Leu-Leu-Dnaを最も良く水解した。また、今回開発した高感度アッセイ法により蛇毒金属プロテアーゼとサーモラシインの間、さらに出血因子とRVV-Xとの間に明白な基質特異性の差のあることが明らかとなった。
期刊论文(15)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
武谷 浩之: "日本生化学会" 「生化学」ミニレヴュー64巻10号. 7 (1992)
竹谷宏之：《日本生物化学会》《生物化学》迷你评论第 64 卷第 10. 7 期（1992 年）
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Toshiyuki Miyata: "Prothrombin Salakta:Substitution of Glutamic Acid-466 by Alaine-redces the Fibrinogen Clotting Activity and the Estarase Activety." Biochemistry. 31. 2457-7462 (1992)
Toshiyuki Miyata：“凝血酶原 Salakta：用丙氨酸替代谷氨酸 466，可降低纤维蛋白原凝血活性和 Estarase 活性。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
東 昌市: "中外医学社" Annual Review血液1992. 12 (1992)
东昌市：《中外医学社》年审血1992. 12 (1992)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Hitoshi Nishimuta: "Human Factor X Has a Tetrasaccharide O-Glycosidically Linked to Serine-61 through the Fucose Residue." 267. 17520-17525 (1992)
Hitoshi Nishimuta：“人类因子 X 具有通过岩藻糖残基与丝氨酸 61 相连的四糖 O-糖苷。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 8 条
    生体防御系に関与する遺伝子群及びタンパク質群の分子進化の研究
    • 批准号：
      07265219
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $1.28万
    • 财政年份：
      1995
    • 负责人：
      岩永 貞昭
    • 依托单位：
      Kyushu University
    無脊椎動物に含まれる抗菌性ペプチド群及びタンパク質群の構造解明と作用機構の研究
    • 批准号：
      07458152
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $4.48万
    • 财政年份：
      1995
    • 负责人：
      岩永 貞昭
    • 依托单位：
      Kyushu University
    血液凝固IX因子血友病BのEGF様ドメインに発見された新しいオリゴ糖鎖の機能解析
    • 批准号：
      07259212
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $1.22万
    • 财政年份：
      1995
    • 负责人：
      岩永 貞昭
    • 依托单位：
      Kyushu University
    生体防御系に関与する遺伝子群及びタンパク質群の分子進化の研究
    • 批准号：
      06273224
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $1.6万
    • 财政年份：
      1994
    • 负责人：
      岩永 貞昭
    • 依托单位：
      Kyushu University