生体防御系に関与する遺伝子群及びタンパク質群の分子進化の研究

生物防御系统涉及的基因和蛋白质的分子进化研究

基本信息

批准号：
07265219
负责人：
岩永貞昭
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

米国産カブトガニ(Limulus polyphemus)のα_2マクログロブリンのcDNAクローニングと全アミノ酸配列:α_2マクログロブリン(α_2M)は、血漿中に多量存在する高分子量プロテアーゼインヒビターであり、無脊椎動物から脊椎動物に至るまで数多くの種から単離されている。カブトガニもその血漿及び血球細胞内に多量のα_2Mを含み、様々なプロテアーゼに対し阻害活性を示す。また、最近、Limulus α_2Mが赤血球を溶血させる補体様活性を持つことが報告されている。本年度は、Limulus α_2Mの構造と機能の相関を明らかにする一歩として、全アミノ酸配列の決定を行った。精製α_2Mの部分アミノ酸配列を基にPCR primerを作製し、血球total RNAを鋳型としてRT-PCRによりプローブを調製し、血球cDNAライブラリーのスクリーニングを行った。得られた3種のオーバーラッピングクローンと5′RACE法を用いることにより、Limulus α_2MをコードとするcDNAの全塩基配列を決定した。Limulus α_2Mは25残基のシグナル配列と1482残基のインヒビ-領域から成り、他の哺乳類のα_2Mとの相同性は、それぞれ、ヒト28%、ラット28%、マウス29%であった。α_2Mファミリーの特徴であるthiol-esterドメイン近傍は高い相同性(ヒトα_2Mと54.4%)を示したが、N末端部分においてはα_2Mファミリーとの相同性は低く、むしろヒトC8のγ鎖と相同性の高い領域が存在した。また、ヒト、ラット、マウスのα_2M間で保存されている2つのinterchainのシステイン残基はLimulus α_2Mでは存在しなかった。

来自美国马蹄蟹（Limulus polyphemus）的α_2大球蛋白的cDNA克隆和总氨基酸序列：α_2macroglobolin（α_2M）是在血浆中发现的高分子量蛋白酶抑制剂，并且已与众多物种分离出来，与近玻璃植物的多种物种分离出来。马蹄蟹的血浆和血细胞中还包含大量α_2M，并且对各种蛋白酶表现出抑制活性。最近还报道说，利卢斯α_2M具有类似的活性，会导致红细胞溶血。今年，我们决定整个氨基酸序列，这是阐明利卢斯α_2M的结构和功能之间相关性的一步。根据纯化的α_2M的部分氨基酸序列制备PCR底漆，并使用总血细胞RNA作为模板制备了探针，并筛选了血细胞cDNA文库。通过使用三个获得的重叠克隆和5'竞赛方法来确定编码Limulusα_2M的cDNA编码cDNA的总碱基序列。 Limulusα_2M由25个残基和1482个残基的抑制区的信号序列组成，在人类中，其他哺乳动物α_2M，28％大鼠和29％小鼠之间具有同源性。 α_2M家族的特征的硫醇 - 晶体结构域表现出很高的同源性（54.4％），但N末端部分与α_2M家族较低，实际上，与人类C8的γ链具有很高的同源性区域。此外，Limulusα_2M中不存在两个链链半胱氨酸残基在人，大鼠和小鼠α_2M之间保守的。