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生体防御系に関与する遺伝子群及びタンパク質群の分子進化の研究

生物防御系统涉及的基因和蛋白质的分子进化研究

基本信息

批准号：
07265219
负责人：
岩永貞昭
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

米国産カブトガニ(Limulus polyphemus)のα_2マクログロブリンのcDNAクローニングと全アミノ酸配列:α_2マクログロブリン(α_2M)は、血漿中に多量存在する高分子量プロテアーゼインヒビターであり、無脊椎動物から脊椎動物に至るまで数多くの種から単離されている。カブトガニもその血漿及び血球細胞内に多量のα_2Mを含み、様々なプロテアーゼに対し阻害活性を示す。また、最近、Limulus α_2Mが赤血球を溶血させる補体様活性を持つことが報告されている。本年度は、Limulus α_2Mの構造と機能の相関を明らかにする一歩として、全アミノ酸配列の決定を行った。精製α_2Mの部分アミノ酸配列を基にPCR primerを作製し、血球total RNAを鋳型としてRT-PCRによりプローブを調製し、血球cDNAライブラリーのスクリーニングを行った。得られた3種のオーバーラッピングクローンと5′RACE法を用いることにより、Limulus α_2MをコードとするcDNAの全塩基配列を決定した。Limulus α_2Mは25残基のシグナル配列と1482残基のインヒビ-領域から成り、他の哺乳類のα_2Mとの相同性は、それぞれ、ヒト28%、ラット28%、マウス29%であった。α_2Mファミリーの特徴であるthiol-esterドメイン近傍は高い相同性(ヒトα_2Mと54.4%)を示したが、N末端部分においてはα_2Mファミリーとの相同性は低く、むしろヒトC8のγ鎖と相同性の高い領域が存在した。また、ヒト、ラット、マウスのα_2M間で保存されている2つのinterchainのシステイン残基はLimulus α_2Mでは存在しなかった。

The cDNA sequence of Limulus polyphemus is completely different from that of other species. α_2 M is abundant in plasma, and there are many species in invertebrate and vertebrate. A large amount of α_2M in the plasma and blood cells of the rat was detected. Recently, Limulus α_2M has been reported as a complement activity in erythrocytes. This year, Limulus α_2M structure and function related to the determination of a step, all kinds of acid allocation PCR primer for the purification of α_2M partial nucleotide sequence, total RNA of blood cells, RT-PCR, and cDNA sequencing. The complete sequence of cDNA was determined by using the 5′RACE method. Limulus α_2M residues 25 and 1482 residues were mapped to the same domain. The homology of α_2M in other mammals was 28%, 28% and 29%.α_2M is characterized by thiol-ester identity near the α_2M and 54.4% near the α_2M. The identity of α_2M is low in the N-terminal part, and the identity of α_2M is high in the N-terminal part. The residue Limulus α_2M is preserved in the interchain.