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金属プロテア-ゼの構造と機能

金属蛋白酶的结构和功能

基本信息

批准号：
03241222
负责人：
岩永貞昭
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

クサリヘビRussell's viper毒より、血液凝固X因子及びIX因子を特異的に限定分解し活性型に変換する酵素のRVVーXを精製し、その全アミノ酸配列を決定した。RVVーXは二本鎖より成り、重鎖(59kDa)と軽鎖(LC1=18kDa/LC2=21kDa)がSーS結合していた。LC1は123残基のアミノ酸から成り、24位のアスパラキンには糖鎖を含んでいる。NBRFデ-タベ-スを用い相同性検索を行なった結果、意外なことに、LC1は肝臓のアシアロ糖蛋白受容体やセレクチンのいわゆるC型レクチンと相同性のあることが見い出された。LC1は半シスチンを7残基持つが、SーS結合が既に決定されているフジツボレクチンとの相同性よりCys4ーCys15、Cys32ーCys121、Cys98ーCys113の3組がSーS結合し、また、LC1に特異的なCys77は重鎖とのSーS結合に関与すると推定した。一方、重鎖はハブ毒の高分量出血因子HR1B(415残基)と酷似していた。すなわち、重鎖はN末端半分の領域に金属プロテア-ゼドメインを含み、亜鉛を配位するリガンドのHis145、His149及び活性残基の一部と考えられているGlu146も保存されていた。一方、C末側には強力な血小板凝集阻止因子であるdisintegrin様の構造ドメインを含んだ。したがって、RVVーXは、軽鎖にC型レクチン様ドメインを、重鎖に金属プロテア-ゼとdisintegrin様ドメインを含む新しいプロテア-ゼであることが明らかとなった。今後は蛇毒の金属プロテア-ゼの高次構造(目下、阪大タンパク研との共同研究でこの種のプロテア-ゼの結晶回析を進めている)をもとに、Zn^<2+>の配位した触媒基の同定及び反応機構、特異性に関連した構造要素などを明らかにしたい。

Russell's viper, coagulation factor X and factor IX are specific for the determination of RV-X activity and acid sequence. RVV-X is a double lock, double lock (59kDa) and double lock (LC1 =18kDa/LC2 =21kDa). LC1 contains the amino acid residue at position 123 and the amino acid residue at position 24. NBRF-1 - 2 - 3 - 4 - 5 - 6- LC1 has three sets of S-binding residues: Cys4-Cys15, Cys32-Cys121, and Cys98-Cys113, and LC1-specific Cys77-S-binding residues. A high component of HR1B (415 residues) resembles a single, double chain toxin. A portion of the His145, His149, and Glu146 residues in the N-terminal half of the chain were preserved. A side, C terminal side of the strong platelet aggregation prevention factor, disintegrin structure, including RVV-X, RVV-X In the future, the higher-order structure of the venom metal molecules (the joint study of the present and future studies) will be discussed, and the coordination of Zn^<2+>, the identification of catalyst groups and the mechanism of reaction, and the specific relationship between structural elements will be clarified.