EGF様ドメインに発見された新しいオリゴ糖鎖の機能解析

EGF 样结构域中发现的新寡糖链的功能分析

基本信息

批准号：
05274219
负责人：
岩永貞昭
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、血液凝固因子のFactor IX,Factor VII, Protein Zや血小板に存在する糖タンパク質のトロンボスポンジンのEGF類似ドメインに新規のO-結合型糖鎖(Xyl-Glc-O-Ser,Xyl-Xyl-Glc-O-Ser)を見出し、すでに報告した。その後、さらにヒトFactor IXの第一EGF類似ドメインのSer-61にFucを介したオリゴ糖が結合していることを見出し、それらの構造と機能について解析してきた。最近、ヒトFactor IXのAP(残基No.146-180に相当)のアミノ酸分析を行なったところ、GlcNH_2に加えてGalNH_2が定量され、O-結合型糖鎖の存在が示唆された。APは、Factor IXを組織因子存在下、VIIa因子で活性化し、逆相HPLCにより単離した。得られたAPをN-グリコシダーゼFで処理し、Asn-結合型糖鎖を除去後、エンドペプチターゼAsp-Nで断片化し、精製したペプチドについて2-アミノピリジンを用いた糖組成分析とシアル酸(SA)の定量を行った。その結果、1molのペプチド当たり、Ga1NAc,Gal,SA,それぞれ1molを含む2つのペプチド(AP157-165,AP166-176)が同定された。両ペプチドのアミノ酸配列分析を行なったところ、Thr-159 とThr-169 に相当するPTH-アミノ酸は全く回収されなかった。従って、これら2つのThr残基にGalNAc,Gal,SAから成るトリサッカライドが結合していると推定した。なお、ヒトFactor IXのAPは、逆相HPLCにより少なくとも3種類に分別されるが、その中で、O-結合型糖鎖を含まないAPも存在することが判明した。

我们已经报道了在血液凝结因子因子IX因子IX，VII，蛋白质Z和蛋白质Z和血小板蛋白，糖蛋白，血小板中存在的新型O连接聚糖（Xyl-GLC-O-SER，Xyl-GLC-O-SER，Xyl-Xyl-Xyl-glc-o-ser）中，并且已经报道。之后，我们发现SER-61是人类因子IX的第一个EGF样域，受FUC介导的寡糖约束，并分析了它们的结构和功能。最近，对人类因子IX AP的氨基酸分析（对应于第146-180号残基）表明，除了GlcNH_2之外，对GalnH_2进行了量化，这表明存在O链的聚糖。在组织因子存在下用因子IX激活AP，并通过反向相HPLC分离。将所得的AP用N-糖苷酶F处理，并在去除ASN连接的糖链后用耐肽酶ASP-N碎裂，并使用2-氨基吡啶分析了纯化的肽的糖组成和糖酸（SA）的定量测定。结果，鉴定了两种含有1摩尔Ga1nac，gal，sa和1 mol的肽（AP157-165，AP166-176）。分析两种肽时，未回收与THR-159和THR-169相对应的PTH-氨基酸。因此，据估计，这两个THR残基由由GalNAC，GAL和SA组成的三糖结合。还发现，人类因子IX的AP可以通过反向相位的HPLC将至少三种类型分开，其中也有不包含O连锁糖链的AP。