EGF様ドメインに発見された新しいオリゴ糖鎖の機能解析

EGF 样结构域中发现的新寡糖链的功能分析

• 批准号: 05274219
• 负责人: 岩永 貞昭
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05274219/
• 关键词: ヒトIX因子; EGF類似ドメイン; O-結合型糖鎖; IX因子由来活性化ペプチド; ガラクトサミン; VII因子; 血友病B因子; 糖鎖構造

我々は、血液凝固因子のFactor IX,Factor VII, Protein Zや血小板に存在する糖タンパク質のトロンボスポンジンのEGF類似ドメインに新規のO-結合型糖鎖(Xyl-Glc-O-Ser,Xyl-Xyl-Glc-O-Ser)を見出し、すでに報告した。その後、さらにヒトFactor IXの第一EGF類似ドメインのSer-61にFucを介したオリゴ糖が結合していることを見出し、それらの構造と機能について解析してきた。最近、ヒトFactor IXのAP(残基No.146-180に相当)のアミノ酸分析を行なったところ、GlcNH_2に加えてGalNH_2が定量され、O-結合型糖鎖の存在が示唆された。APは、Factor IXを組織因子存在下、VIIa因子で活性化し、逆相HPLCにより単離した。得られたAPをN-グリコシダーゼFで処理し、Asn-結合型糖鎖を除去後、エンドペプチターゼAsp-Nで断片化し、精製したペプチドについて2-アミノピリジンを用いた糖組成分析とシアル酸(SA)の定量を行った。その結果、1molのペプチド当たり、Ga1NAc,Gal,SA,それぞれ1molを含む2つのペプチド(AP157-165,AP166-176)が同定された。両ペプチドのアミノ酸配列分析を行なったところ、Thr-159 とThr-169 に相当するPTH-アミノ酸は全く回収されなかった。従って、これら2つのThr残基にGalNAc,Gal,SAから成るトリサッカライドが結合していると推定した。なお、ヒトFactor IXのAPは、逆相HPLCにより少なくとも3種類に分別されるが、その中で、O-結合型糖鎖を含まないAPも存在することが判明した。

In this paper, we report the new O-linked glycan chain (Xyl-Glc-O-Ser,Xyl-Xyl-Glc-O-Ser) for Factor IX,Factor VII, Protein Z and the presence of glycogen in platelets. The first EGF of Factor IX is similar to Ser-61 and Fuc. The structure and function of Factor IX are analyzed. Recently, acid analysis of AP(residues No. 146 -180) of Factor IX has been carried out, and quantitative analysis of GlcNH_2 and GalNH_2 has been carried out. The existence of O-binding glycans has been demonstrated. AP, Factor IX, Factor VIIa, Reverse Phase HPLC After removal of the Asn-bound glycan lock, the enzyme was selected to fragment and refine the enzyme, and the enzyme was used to analyze the sugar composition and quantify the acid. Results, 1 mol of the compound, Ga1NAc,Gal,SA, 1 mol of the compound, 2 mol of the compound (AP157-165,AP166-176) are identical. The analysis of the acid sequence of PTH-A and PTH-B is carried out in the following ways: Thr-159 and Thr-169 are equivalent to PTH-A. The Thr residues GalNAc,Gal,SA were determined to be bound to each other. The presence of AP in Factor IX was identified by reverse phase HPLC.

项目成果

Fuminori Tokunaga: "Limulus Hemocyte Transglutaminase: cDNA Cloning, Amino Acid Sequence, and Tissue Localization." J. Biol. Chem.268. 262-268 (1993)

Fuminori Tokunaga：“鲎血细胞转谷氨酰胺酶：cDNA 克隆、氨基酸序列和组织定位。”

Hitoshi Nishimura: "Factor IX Fukuoka:Substitution of Asn-92 by His in the Second Epidermal Growth Factor-like Domain Results in Defective Interaction with FactorsVIII/X." J. Biol. Chem.268(32). 24041-24046 (1993)

Hitoshi Nishimura：“因子 IX Fukuoka：在第二表皮生长因子样域中用 His 取代 Asn-92 会导致与因子 VIII/X 的相互作用有缺陷。”

Tatsushi Muta: "Horseshoe Crab Coagulation Factor B: A Unique Serine Protease Zymogen Activated by a Cleavage between I1e-I1e Bond." J. Biol. Chem.268. 21384-21388 (1993)

Tatsushi Muta：“鲎凝固因子 B：一种独特的丝氨酸蛋白酶酶原，由 I1e-I1e 键之间的裂解激活。”

西村 仁: "糖鎖の多様な世界(木幡陽、箱守仙一郎、永井克孝 編)" 講談社サイエンティフィク, 16 (1993)

西村仁：“糖链的多样化世界（由小畑阳、箱森千一郎和永井胜隆编辑）”讲谈社科学，16（1993）

Fuminori Tokunaga: "Limulus Hemocyte Transglutaminase: Its Purification and Characterization,and Identification of the Intracellular Substrates." J. Biol. Chem.268. 252-261 (1993)

Fuminori Tokunaga：“鲎血细胞转谷氨酰胺酶：其纯化和表征，以及细胞内底物的鉴定。”