新しい癌関連ムチンコア蛋白抗原の遺伝子およびエピトープ解析と診断応用

新型癌症相关粘蛋白核心蛋白抗原的基因和表位分析及诊断应用

• 批准号: 04253237
• 负责人: 今井 浩三
• 金额: $ 8.96万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04253237/
• 关键词: ムチン抗原; MUC1; モノクローナル抗体; 抗ムチン抗原; CTL; 糖鎖異常; MuC-1遺伝子; エピトープ; タンデム・リピート

これまで申請者らは、モノクローナル抗体(MAb)MUSE11により検出れる癌関連ムチン抗原分子のコア蛋白について解析し、本抗体がコア蛋白の20アミノ酸より成るtandem repeat部分を認識しており、遺伝子産物としてのムチン分子を検出する上できわめて有用であることを報告してきた。また、コア蛋白cDNAをクローニングし、その一部を用いて組み換え蛋白を作製し、これを免疫原として数種の新しい抗コア蛋白MAbを確立した。以上の実績に基き、本研究においてはさらに解析を進めた。1)コア蛋白のtandem repeat部分に存在するPDTRP配列について、オーバーラップする数種のペプチドを合成し、エピトープマッピングを行った。2)内部イメージを有する抗イディオタイプMAbを既報(Cancer Res.,51:2599,1991)に基いて作製し、RT-PCR法を用いてV領域のcDNAクローニングを行いアミノ酸配列を決定した。3)組み換えムチンコア蛋白を抗原として、ELISA法あるいはウェスタンブロット法を用い、癌患者血清中の抗コア蛋白抗体を検索する。また、本蛋白を免疫原として、cytotoxic T細胞を誘導しうることが明らかになっているので、その性状について検討した。その結果、CTL line(TN)はCD3およびCD8陽性で、かつalphabeta型TCRを示した。4)正常組織においてはフコースがMUSE11のエピトープを一部maskすることが明らかとなったので、MUSE11抗原の検出されない癌組織や細胞株において、fucosyltransferaseの発現レベルを酵素活性測定により検討することが可能となりつつある。

これまでApplicant らは、モノクローナルantibody (MAb)MUSE11により検出 れるCancer-related ムチAntigen molecule のコアprotein について analysis し, this antibody がコアprotein の20 アミノ acid より成るtandem The repeat part しており, the remaining product としてのムチンmolecule を検出する上できわめて useful であることをreport してきた.また, コアprotein cDNA をクローニングし, その一を use いて group み in exchange for えprotein We have produced several new immunogens and established anti-Ana protein MAbs. The above results are based on the analysis of this research. 1)コアproteinのtandem The repeat part exists and the PDTRP arrangement is there.ップするSeveral kinds of のペプチドをsynthetic し, エピトープマッピングを行った. 2) Internal cancer prevention and control system (Cancer) Res., 51: 2599, 1991) The RT-PCR method was based on the determination of the acid sequence of the cDNA sequence in the V domain. 3) Group exchange of protein and antigen and ELISA method The スタンブロット method is used to detect anti-コアprotein antibodies in the serum of cancer patients.また, this protein を immunogen と し て, cytotoxic T cell を induction し う る こ と が 明 ら か に な っ て い る の で, そ の traits に つ い 検し た. The results showed that CTL line (TN) was positive for CD3 and CD8, and that it was positive for alphabeta type TCR. 4)Normal tissue においてはフコースがMUSE11のエピトープをPart m askすることが明らかとなったので、MUSE11antigenの検出されないCancer tissue や cell line において, fucosyltransferase の発成レベルを enzyme activity assay により検 Discussion することがpossible となりつつある.

项目成果

Hinoda,Y.et al.: "Primary stvucture of the vanialle regions of a mono-clonal antibody MUSELL recognizing the tandem repeat" J.Clin.Lal.Analysis. 7. 100-104 (1993)

Hinoda,Y.et al.：“识别串联重复序列的单克隆抗体 MUSELL 的 vanialle 区域的主要结构”J.Clin.Lal.Analysis。

Imai,K.et al.: "Detection of circulating pancreas camcer-associated amtigh MuSELL by a new monoclonal an tibody" Oncology(Life Sci.Adv.). 11. 51-57 (1992)

Imai,K.et al.：“通过新的单克隆抗体检测循环胰腺癌相关 amtigh MuSELL”肿瘤学（生命科学高级）。

Bara,J.: "A fucose residue can mask the muc-1 epitopes in normal and cancerous qastric mucosae." Int.J.Cancer. 54. 607-613 (1993)

Bara,J.：“岩藻糖残基可以掩盖正常和癌性胃粘膜中的 muc-1 表位。”

Yamashita,K.: "Immunohistochemical study of mucin carbohydrates and core proteins in hepatolithiasis and cholangiocarcincma" Int.J.Cancer. (1993)

Yamashita,K.：“肝结石和胆管癌中粘蛋白碳水化合物和核心蛋白的免疫组织化学研究”Int.J.Cancer。

Hinada,Y.et al.: "Circulating tumar-associated amtigens detected by monoclonal an tibodies against the goly pegtede core of mucin" Gastroen terol.JaN.27. 390-395 (1992)

Hinada,Y.et al.：“通过针对粘蛋白的 goly pegtede 核心的单克隆抗体检测循环肿瘤相关的抗原”Gastroen terol.JaN.27。