パラミクソウイルスのRNA Editingの分子機構

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ヒトパラインフルエンザウイルス-HPIV-2及びSV41-のP遺伝子に見い出されたRNA Editingの分子機構を解析する為に、ミニシストロンを構築した。このミニシストロンは両端にHPIV-2のリーダー配列(およびR1配列)とトレイラー配列、その中央にSV41のP遺伝子を組み込んであり、このcDNAをブルースクリプトIIベクターのT3プロモーターの下流に組み込みT3RNAポリメラーゼを用いてゲノムセンスRNA(VRNA)をオンオフ合成した。この合成RNAをHPIV-2感染HeLa細胞にtranfectして、20〜24時間後にこの細胞からRNAを分離精製し、リバースPCR法により、ゲノムセンスRNA(VRNA)あるいはmRNAセンスRNA(cRNA)の解析を行った。その結果,(1)R1配列を含むRNAの場合にはcRNAのみが検出され、SV41のP遺伝子がmRNAに転写されていることが示唆されたので、PCR産物をクローニングしてその塩基配列を調べたが、現在までのところ、edited RNAを検出できていない。(2)R1配列を含まないRNAの場合にはvRNAおよびcRNAの両センスのRNAが検出され、RNAのReplicationが起こっていることが示めされた。なおRNAを導入した細胞の上澄みを新たなHeLa細胞に接種したところ32代断代後の細胞内にもvRNAが検出されたので、P遺伝子のEncapsidationおよびPackagingが起こっていると考えられる。次にHPIV P遺伝子のcDNA(P蛋白をコードしている)をYM-1ベクターに組み込み、ReaeombinantのBaculo virusを作製して、P蛋白を発現させたところ、P蛋白とともにV蛋白も発現された。この機構を解析する為にmRNAを解析したところ、edited mRNAが見い出された。現在詳しい解析を行なっているところである。