血管平滑筋のイノシトール1,4,5-三リン酸結合蛋白

血管平滑肌肌醇1,4,5-三磷酸结合蛋白

• 批准号: 05256224
• 负责人: 平田 雅人
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05256224/
• 关键词: IP_3; IP_3結合蛋白; 血管平滑筋

血管平滑筋からイノシトール1、4、5-三リン酸(IP_3)認識蛋白を精製するため,IP_3固定化レジンを作製した。はじめにIP_3認識蛋白が大量に存在するラット大脳可溶性分画をIP_3固定化カラムにかけた。IP_3結合活性を追跡しながら130kDと85kDの二種類の分子が新規のIP_3結合分子であることを発見した。決定した部分アミノ酸配列の相同性検索から85kD分子はホスホリパーゼCのdelta1型アイソザイム(PLCdelta1)であることが分かった。本研究では,自然発症高血圧ラット(SHR)の大動脈からPLCdelta1のcDNAをクローニングした姫路工大の八木澤仁助教授と共同で,次の目的で研究を推進した。(1)全遺伝子を発現させPLCdelta1が新規のIP_3結合蛋白であることを確認する。(2)部分欠失ミュータントの発現実験からPLCdelta1中のIP_3結合性ドメインを決定する。SHR-PLCdelta1遺伝子を発現ベクター(pGEX-2T)にサブクローニングしgluthatione-S-transferase(GST)との融合蛋白として大腸菌(菌株DH5a)に発現させた。ベクターをトランスフェクトした大腸菌の超音波破砕上清には,対照上清では認められなかった[^3H]IP_3結合活性が認められ,さらにgluthatione-Sepharoseカラムにかけると10mM-gluthationeで競合溶出した分画にのみ[^3H]IP_3結合活性が認められた。このように「PLCdelta1はIP_3結合分子であること」が証明された。またSHR-PLCdelta1遺伝子のいろいろな部位を欠失させたミュータントも発現ベクター(pGEX-2T)にサブクローニングし大腸菌に発現させた実験等によって結合部位はN末端から60番目までに存在することが分かった。

Vascular smooth muscle か ら イ ノ シ ト ー ル 1, 4, 5-3 リ ン acid (IP_3) understanding protein を refined す る た め, IP_3 immobilized レ ジ ン を cropping し た. Youdaoplaceholder0 じめにIP_3 recognizing protein が is present in large quantities of に するラット large 脳 soluble fractions をIP_3 immobilized カラムに けた けた. IP_3 binding activity を tracing し な が ら 130 kd と 85 kd の two kinds の molecular が new rules の IP_3 combined with molecular で あ る こ と を 発 see し た. Decision し た part ア ミ ノ acid with column の identity 検 cable か ら 85 kd molecular は ホ ス ホ リ パ ー ゼ の C type delta1 ア イ ソ ザ イ ム (PLCdelta1) で あ る こ と が points か っ た. This study で は, natural 発 disease high blood 圧 ラ ッ ト (SHR) の artery か ら PLCdelta1 の cDNA を ク ロ ー ニ ン グ し た himeji technical university の yagi ze ren assistant professor と で together, time の objectives で を propulsion し た. (1) The complete 伝 sub-を shows させPLCdelta1が new rule for IP_3 binding protein である とを とを とを confirmation する. (2) Partial deficiencies: ュ ュ タ タ ト ト ト the actual experiment of らPLCdelta1, the binding of <s:1> IP ₃, ドメ を を decision する. Traces of SHR - PLCdelta1 伝 son を 発 now ベ ク タ ー (pGEX - 2 t) に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し gluthatione - S - transferase (GST) と の fusion protein と し て coliform (strain DH5a) に 発 now さ せ た. ベ ク タ ー を ト ラ ン ス フ ェ ク ト し た coliform の ultrasound broken 砕 supernatant に は, polices according to supernatant で は recognize め ら れ な か っ た [^ 3 h] IP_3 binding activity が recognize め ら れ, さ ら に gluthatione - Sepharose カ ラ ム に か け る と 10 mm - gluthatione で co-opetition dissolution し draw に た points Youdaoplaceholder0 [^3H]IP_3 binding activity が recognize められた. <s:1> ように ように "PLCdelta1 IP_3 binding molecule である と と" が proves された. ま た SHR - PLCdelta1 posthumous son 伝 の い ろ い ろ な parts を owe lost さ せ た ミ ュ ー タ ン ト も 発 now ベ ク タ ー (pGEX - 2 t) に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し coliform に 発 now さ せ た be 験 etc に よ っ て combining site は N terminal か ら 60 times eye ま で に exist す る こ と が points か っ た.

项目成果

Sasaguri,Toshiyuki: "Protein kinase C-mediated inhibition of vascular smooth muscle cell proliferation." Experimental Cell Research. 208. 311-320 (1993)

Sasaguri,Toshiyuki：“蛋白激酶 C 介导的血管平滑肌细胞增殖抑制。”

Hirata,Masato: "DL-myo-inositol 1,2,4,5-tetrakisphosphate,a potent analogue of D-myo-inositol 1,4,5-trisphosphate." Molecular Pharmacology. in press. (1994)

Hirata, Masato：“DL-肌醇 1,2,4,5-四磷酸，D-肌醇 1,4,5-三磷酸的有效类似物。”

Hirata,Masato: "Roles for hydroxyl groups of D-myo-inositol 1,4,5-trisphosphate in the recognition by its receptor and metabolic enzymes." The Journal of Biological Chemistry. 268. 19260-19266 (1993)

Hirata,Masato：“D-肌醇 1,4,5-三磷酸羟基在其受体和代谢酶识别中的作用。”