T4ファージ尾繊維および小尾繊維とリポ多糖との相互作用

T4噬菌体尾纤维和小尾纤维与脂多糖的相互作用

• 批准号: 09240210
• 负责人: 有坂 文雄
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09240210/
• 关键词: バクテリオファージT4; 尾繊維; 小尾繊維; リポ多糖; Rコア糖鎖1; 感染; 表面プラズモン共鳴法; 糖・蛋白質相互作用

小尾繊維(gp12)について、遺伝子12をT7プロモーターを持つプラスミドにクローニングしたベクターpTB6による大量発現系および調製法を確立した。当面 蛋白質としてはgp12に焦点を合わせることとした。リポ多糖(LPS)自体の調製は試験段階を終わり順調に行われているが、LPSは脂質の部分で会合しやすく、単離したLPSは通常大きな会合体を形成している。透析電気泳動法によって二価カチオンを除くことによってより沈降係数の小さなものになるが、それでもかなり大きな会合体である。精密な物理化学的測定を行うためには、より均一なLPSまたは糖鎖部分を得ることが望ましい。そこで、1%酢酸による比較的穏和な酸処理によって多糖の部分を切り離して用いることにした。LPSを1%酢酸で100℃、90分処理した後、分別遠心とゲルろ過(Sephadex G50)によって、糖鎖部分を得た。現在、構造を質量分析によって確認中である。期待される構造体が得られたと考えて、このものをEDCとNHSで活性化したデキストラン上のカルボキシル基にアミノ基を介して固定化した。この基盤上にgp12溶液を添加したところ、期待された双曲線状のシグナルの増加が観測されたが、まだ速度定数を決定するには至っていない。いずれにしても今回の実験でIAsysを用いて糖鎖と小尾繊維の相互作用を測定する見通しが得られた。

Small tail dimension (gp12) is the most important component, and the transmission element 12 is the most important component. protein The regulation of LPS by itself may be carried out in sequence, and some of the LPS lipids may be combined and separated. LPS may be formed in large groups. Dialysis electrokinetic method is used to divide the sedimentation coefficient into two parts. Precise physical and chemical determination of LPS 1% acetic acid and 1% acetic acid were used to separate polysaccharides from each other. LPS 1% acetic acid at 100℃, 90 minutes after treatment, respectively, the remote center of the gel (Sephadex G50), the sugar lock part of the gel. Now, the structure of the quality analysis, confirm the middle. It is expected that the structure will be immobilized by EDC and NHS. The addition of gp12 solution on the substrate is expected to increase the hyperbolic curve and determine the velocity of the solution. In the middle of the day, the IAsys is used to determine the interaction between sugar and small tail dimensions.

项目成果

中村春木: "タンパク質のかたちと物性(共編著)" 共立出版社, 234 (1997)

Haruki Nakamura：“蛋白质的形状和物理性质（共同编辑）”Kyoritsu Shuppansha，234（1997）

Hisayuki MORII: "Identification of Kinesin Neck Region as a Stable α-Helical Coiled-Coil and Its Thermodynamic Charcterization" Biochemistry. 36・7. 1933-1942 (1997)

Hisayuki MORII：“驱动蛋白颈部区域作为稳定 α-螺旋卷曲线圈的识别及其热力学表征”生物化学 36・7（1997）。

Takayo SASAKI: "Nucleotide Sequences of the Contractile Tail Sheath and Tube Genes of Bacteriophage PS17 and Amino Acid Sequences of Their Products" Res.Comm.Biochem,& Mol.Biol. 1・1. 93-106 (1997)

Takayo SASAKI：“噬菌体 PS17 的收缩尾鞘和管基因的核苷酸序列及其产物的氨基酸序列”Res.Comm.Biochem，& Mol.Biol 1・1（1997）。

Takuro MATSUI: "Isolation and Characterization of a Molecular Chaperone,gp57A,of Bacteriopahge T4" Journal of Bacteriology. 179・6. 1846-1851 (1997)

Takuro MATSUI：“Bacteriopahge T4 分子伴侣的分离和表征”细菌学杂志 179・6（1997 年）。

武田茂樹: "ネガティブ染色…簡便で高分解能の染色法" 細胞工学. 16・6. 881-889 (1997)

武田茂树：“负染色...简单且高分辨率的染色方法”《细胞工程》16・6（1997）。