巨大ヒトゲノム導入による機能解析

引入巨型人类基因组进行功能分析

• 批准号: 09272218
• 负责人: 和田 守正
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09272218/
• 关键词: 酵母人工染色体; YAC導入; MDR1; 発現クローニング; 位置効果; DNAメチル化; 薬剤耐性; エクソントラップ法

ヒトMDR遺伝子領域をモデルクローンに用いて、導入YACの動態、導入効率を解析し、YAC導入法の再現性を規定しうる因子は何かを検討するとともに、YAC導入法を応用して、実際に発現クローニングを試みた。その結果、1.MDR1のcDNAを用いた導入実験によると、薬剤耐性トランスフェクタント/Neo^rトランスフェクタントの効率は0.06%である。これに対し、YACクローンを用いた場合、Neo^rトランスフェクタント全てが耐性を獲得していることを示し、cDNAを用いた場合に見られる挿入位置による発現量の不均一性を回避できることを示唆した。2.導入YACの動態の解析、5aza-CdR処理実験により、この挿入位置非依存的発現は、導入DNAのメチル化からの回避によることを明らかにした。3.このYAC導入法を発現クローニングに応用して、新規耐性関連遺伝子の探索を試みた。MDR1周辺の300kb及び850kbYACの導入細胞につき、MDR1遺伝子産物と薬剤感受性の相関を検討した結果、この領域の新規耐性関連遺伝子の存在が示唆された。さらに、エクソントラップ法によりこの領域の60エクソンを単離した。このうち膜タンパク質をコードする遺伝子が6種類存在し、薬剤トランスポータとして薬剤感受性に関与していることが示唆された。以上の成果からYAC導入による発現系の有用性が示されたが、発現クローニングへ応用するためには導入効率を改善し、挿入位置非依存的発現の一般性を検討する必要がある。従って、従来の成果をさらに発展させ広範なシステムに効率よく適用させるために、今後1.YACを環状化した後導入する方法を開発して、YAC導入時の専断力を避け、効率を上昇させる、2.メチル化による導入遺伝子の選択的発現の一般性を他の遺伝子クローンについて検討する、ことなどが必要であると考えられる。

In the sub-domain of MDR, you need to know how to use it, enter the YAC status, analyze the import rate, specify the impact factors in the YAC entry Act, apply the YAC license, and apply the license to the international market. The results show that 1.MDR1

项目成果

Kusaba,H: "Maintenance of Hypomethylation Status and Preferential Expression of ExogenousHuman MDR1 / PGY1 Genein Mouse L Cells by YACMediated Transfer." Somat.Cell.Mol.Genet.(in press). (1998)

Kusaba,H：“通过 YAC 介导的转移维持外源人 MDR1 / PGY1 基因小鼠 L 细胞的低甲基化状态和优先表达。”

Tanaka,T.: "The Pi-class glutathione S-transferase is closely associated with drug sensitivity to alkylating agentsandcisplatin in human cancer cells." Int.J.Oncology. 10. 1009-1014 (1997)

Tanaka, T.：“Pi 类谷胱甘肽 S-转移酶与人类癌细胞对烷化剂和顺铂的药物敏感性密切相关。”

Koike,K.: "Human Canalicular Multispesific Organic Anion Transopter (cMOAT)Antisense cDNA Enhances Drug Sensitivity in Human Hepatic Cancer Cells." Cancer Res.57. 5475-5479 (1997)

Koike,K.：“人小管多特异性有机阴离子 Transopter (cMOAT) 反义 cDNA 增强人肝癌细胞的药物敏感性。”

Kohno,K.: "Construction and characterization of a rad51rad52 double mutant as a host for YAClibraries." Gene,. 188. 175-181 (1997)

Kohno,K.：“作为 YAC 文库宿主的 rad51rad52 双突变体的构建和表征。”

Torigoe,K: "Transcription Map of 1.5 Megabasesof DNA Spanning the Multidrug Resistance GeneRegion of Human Chromosome 7q21.1" Genomics.(in press). (1998)

Torigoe,K：“跨越人类染色体 7q21.1 多药耐药基因区域的 1.5 兆碱基 DNA 转录图谱”基因组学。（正在出版）。