巨大ヒトゲノム導入による機能解析

引入巨型人类基因组进行功能分析

• 批准号: 10168221
• 负责人: 和田 守正
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10168221/
• 关键词: 酵母人工染色体; YAC導入; MDR1; 発現クローニング; 位置効果; DNAメチル化; 遺伝子ファミリー; 薬剤耐性

ヒトMDR1遺伝子および、それが属するABCトランスポーターファミリー遺伝子領域をモデルとして、YAC導入による機能解析法について以下の項目を検討した。その結果、【1】導入YACの動態の解析:YAC導入による位置効果非依存的発現は、導入DNAのメチル化からの回避によることを昨年度示唆した。今年度はさらに、(1)MDR1プロモーター領域のプラスミド、ファージクローンを用いた場合、約50%のトランスフェクタントでMDR1プロモーターのメチル化が観察されるのに対し、YACクローンを用いた場合、MDR1プロモーターのメチル化が観察されないこと、(2)このメチル化からの回避は、導入コピー数に非依存的であることを明らかにし、遺伝子移入にYACを用いる事により内在性遺伝子と同様のクロマチン構造、脱メチル化状態を維持出来る可能性が期待された。また、(3)YAC導入による機能解析により明らかになった、このメチル化によるヒトMDR1遺伝子のスイッチ・オン、オフは、急性骨髄性白血病などの臨床においても認められることを明らかにした。【2】導入効率の改善と巨大ゲノム機能解析のためのベクター系開発:YAC導入の全ての方法で、移入の効率を妨げている専断力を回避し、かつ巨大ゲノム機能解析のために、Cre-lox系を利用した「YAC環状化」ベクターを構築した。【3】遺伝子ファミリーのゲノム構成:ゲノムの設計原理にアプローチする一つの方法として、遺伝子ファミリーのゲノム構造、周辺の遺伝子構成を把握する。モデルファミリーとして、大腸菌で最大の遺伝子ファミリーであることが明らかになったATP結合カセット(ABC)トランスポーターを取り上げる。本年度は、MDR1遺伝子領域1.5Mbに関して、YAC DNAからのエクソントラップ法により遺伝子構成の詳細を把握した。また、ゲノム構造の特性、その破綻と疾病との接点を探っている。

The following items are discussed in the function analysis method of MDR1 transmission and transmission domain. Results: [1] Dynamic analysis of YAC introduction: position-independent occurrence of YAC introduction, avoidance of YAC introduction This year,(1) MDR1's category, category, and category are used in approximately 50% of cases, and MDR1's category, category, and category are used in approximately 50% of cases, and YAC's category is used in approximately 50% of cases. The possibility of maintaining the YAC status is expected. (3) Functional analysis of YAC introduction, identification of MDR1 gene, identification of acute osteoblastic leukemia and clinical diagnosis of YAC. [2] Improvement of import efficiency and analysis of huge demand function: development of system:YAC import method, migration efficiency, interruption force avoidance, analysis of huge demand function, Cre-lox system utilization,"YAC cyclization". [3] The composition of the genetic element: the design principle of the genetic element, the method of selection, the genetic element structure, the genetic element composition of the periphery. The most common type of bacteria is Escherichia coli, and the most common type is Escherichia coli. This year, the MDR1 gene domain 1.5 Mb related, YAC DNA detection and analysis method, the gene composition of the detailed grasp The characteristics of the structure, the flaws, the diseases and the joints are explored.

项目成果

Toh,S., et. al.: "Genomic atructure of the canalicular multispecific organic anion tranporter(cMDAT)gene and mutations in the ATP binding cassetteregion in Dubin-Johnson syndrome." American Journal of Human Genetics. in press. (1999)

Toh，S.，等。

Uchiumi,T.,et al.: "Isolation of a novel human canaticular multispecific organic anion transporter,cMDAT2/NRP3,and its expression in cisplatin-resistant cells eith decreased ATP depdendent drug transport." Biochem.Biophys.Res.Comm.252. 103-110 (1998)

Uchiumi,T.,et al.：“分离出一种新型人导管多特异性有机阴离子转运蛋白 cMDAT2/NRP3，及其在顺铂耐药细胞中的表达，可减少 ATP 依赖性药物转运。”