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Gene Targetingによる遺伝子機能の解析

通过基因打靶分析基因功能

基本信息

批准号：
02680215
负责人：
和田守正
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02680215/
关键词：
Gene Targeting 相同組み換え組み換え HPRT遺伝子ミニサテライトDNA ZーDNA YAC

项目摘要

本研究の目的「相同組み換えに関与する因子の実体を明らかにし、それを利用して効率のよいGene Targetingの系を開発する。」に即して、本年度は特に相同組み換えにシスに作用する領域(以下「シス領域」)の探索を行なった。[I]「研究計画」に即し、マウスHPRT遺伝子中にNeo^r遺伝子の挿入を持つpRV9.1(Thomas and Capecchi,1987)を改変し、シス領域クロ-ニングベクタ-を作成した。次に、上記ベクタ-のHPRT遺伝子に近接した部位にマウスゲノムDNAを挿入したライブラリ-を作成し、C57/BLマウス由来の細胞に導入してNeo耐性、6ーチオグアニン耐性細胞を得た。現在、この細胞からシス領域の回収を試みている。[II]上記スクリ-ニングに加え、特別な塩基配列、構造をとっているDNAがシス領域として機能するか否かを直接検定するために、マウスの相同組み換えのホットスポットとしての可能性が指摘されているミニサテライトDNA、ZーDNA等を合成し、上述のシス領域クロ-ニングベクタ-に組み込み、これらのDNA配列が相同組み換え頻度を上昇させ得るか否かを検討中である。[III]高等真核生物の相同組み換え効率の上昇に巨大DNA分子が有効であることがCapecchiらにより報告されている(Science,1989)ので、我々は巨大YACクロ-ンを用いたGene Targeting系の開発も進めている。ここでも相同組み換え体の選別が容易なHPRT遺伝子を利用した。そのためにヒト染色体としては、HPRT遺伝子が存在するX染色体のみを含むヒト.CHO雑種細胞を用いてYACライブラリ-を作成し(Wada et al.,1990;Abidi et al.,1990)、HPRT遺伝子を含むYACクロ-ンを単離した。現在、ヒト培養細胞へのYACクロ-ンの導入条件を検討中である。

The purpose of this study is to explore the Gene Targeting system of the same group of genes. This year, we will explore the same areas of activity (hereinafter referred to as "areas of activity"). [I]"Research Project" refers to the development of Neo^r gene in HPRT gene (Thomas and Capecchi,1987). In addition, the DNA of Mausesgunum was inserted into the proximal part of the HPRT gene above, and the Neo-and 6-Ologan-resistant cells were introduced into the cells derived from C57/Mausesgunum. Now, this cell is in the middle of the field, and it's in the middle of the field. [II]Note the possibility of direct identification of DNA, Z-DNA, etc., in the same group, especially in the region of DNA, in the region of DNA. The frequency of DNA changes in the same group increased. [III]The increase in the rate of homologous recombination in higher eukaryotes has led to the development of giant DNA Targeting systems, as reported in Science,1989. It is easy to select the same group of products and use the HPRT gene. The presence of HPRT gene in CHO cells was studied by using YAC gene.(Wada et al., 1990;Abidi et al., 1990)The HPRT is the only one that contains YAC. Now, the conditions for introducing YAC into cultured cells are discussed.