酵素によるビタミンB_<12>補酵素の構造認識と補酵素機能の発現

酶对维生素B_<12>辅酶的结构识别及辅酶功能的表达

• 批准号: 02250108
• 负责人: 虎谷 哲夫
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02250108/
• 关键词: ビタミンB_<12>補酵素; アデノシルコバラミン; ジオ-ルデヒドラ-ゼ; ビタミンB_<12>アナログ

1.酵素によるビタミンB_<12>補酵素のヌクレオチド部の構造認識と補酵素機能の発現B_<12>補酵素(アデノシルコバラミン;AdoCbl)の下方配位子のリボ-ス部を2〜6個のメチレン鎖で置換したアナログ、及びトリメチレン体の5,6ージメチルベンズイミダゾ-ル(DBI)部をイミダゾ-ル(Im)で置換したアナログを合成し、ジオ-ルデヒドラ-ゼを用いて補酵素機能を調べた。その結果、DBI部とリン酸部の連結鎖長が天然型に近いトリメチレン体とテトラメチレン体アナログはAdoCblのそれぞれ59%及び50%の活性を保持していたが、連結鎖がこれより長くなっても短かくなっても活性は失われ、酵素との親和性も低下することが分かった。従って、リボ-ス部はDBI部を適切な距離と方向に保つスペ-サ-としての役割を果たしていると考えられる。Ado型のImトリメチレン体は、初速度でみると8.2%の活性を示したが、反応中に天然補酵素の400倍以上も高い確率で酵素の不活性化を引き起こした。従って、AdoCblのDBIのジメチルベンゾ部分は、補酵素機能発現に重要であるばかりでなく、反応中間体の安定化を通じて酵素の不活性化を防止する役割も果たしていると結論される。2.ジオ-ルデヒドラ-ゼ遺伝子のクロ-ニング<Klebsiella>___ー <oxytoca>___ー ATCC8724のゲノムDNAより、ゲノムDNAライブラリ-を調製した。ジオ-ルデヒドラ-ゼの部分アミノ酸配列より予測された塩基配列を持つ50merの合成オリゴDNAをプロ-ブとして、このゲノムDNAライブラリ-をスクリ-ニングし、約4,000クロ-ンより11個のハイブリダイゼ-ションポジティブクロ-ンを単離した。これら11個のクロ-ンをグリセロ-ルおよび1,2ープロパンジオ-ルを炭素源とする培地で好気培養した後、酵素活性を測定したところ、2個のクロ-ンが<K.>___ー <oxytoca>___ー ATCC8724に匹敵する高い比活性を示した。

1. Enzyme によるビタミンB_<12> Understanding the structure of enzyme supplements and supplementing enzyme functions B_<1 2>Supplement the enzyme (AdoCbl) with 2 to 6 lower coordination subunits The replacement of the lock and したアナログ, and the びトリメチレン体の5,6ージメチルベンズイミダゾ-ル(DBI)をイミダゾ-ル(Im)でしたアナログをsynthetic し,ジオ-ルデヒドラ-ゼを use いて to supplement the enzyme function and adjust the べた. The result of その, DBI part とリン acid part の connection lock length が natural type に near いトリメチレン体とテトラメチレン体アナログはAdoCblのそれぞれ59%和び50% of the activity is maintained and the link lock is long and short. The activity of the enzyme has been lost, and the affinity of the enzyme has been reduced.従って、リボ-ス部はDBI部をappropriate cutなdistanceとdirectionに宝つスペ-サ-としてのservice cutをfruitたしていると考えられる. Ado type のImトリメチレンbody は, initial speed でみると 8.2% active をshow したが, The reaction rate of the natural supplement enzyme is more than 400 times, and the enzyme is deactivated with high accuracy.従って、AdoCblのDBIのジメチルベンゾPartは、Enzyme supplement function is now importantであるばかりでなく、Stabilization of the reaction intermediate and inactivation of the enzyme をPrevention of cutting and cutting of the fruit たしているとConclusionされる. 2.ジオ-ルデヒドラ-ゼ伝子のクロ-ニング<Klebsiella>___ー <oxytoca>___ーATCC8724のゲノムDNAより、ゲノムDNAライブラリ-をmodulationした.ジオ-ルデヒドラ-ゼのpartial アミノacid alignment よりpredicted された塩base alignment Synthetic オリゴDNAをプロ-ブとして、このゲノムDNAライブラリ-をスクリ-ニングし, about 4,000クロ-ンより11のハイブリダイゼ-ションポジティブクロ-ンを単里した.これら11のクロ-ンをグリセロ-ルおよび1,2ープロパンジオ-ルをcarbon source とするAfter cultivating the soil with good quality, the enzyme activity was measured, and 2 のクロ-ンが<K.>___ー<oxytoca>___ー ATCC8724 has a high specific activity comparable to that of ATCC8724.

项目成果

TORAYA Tetsuo: "Roles of the DーRibose and 5,6ーDimethylbenzimidazole Moieties of the Nucleotide Loop of Adenosylcobalamin in Manifestation of Coenzymic Function in the Diol Dehydrase Reaction" The Journal of Biological Chemistry. 266. (1991)

TORAYA Tetsuo：“腺苷钴胺素核苷酸环中的 D-核糖和 5,6-二甲基苯并咪唑部分在二醇脱水酶反应中表现出辅酶功能的作用”《生物化学杂志》266。