微生物由来がん遺伝子機能抑制物質の研究

微生物来源的癌基因功能抑制剂的研究

• 批准号: 03258241
• 负责人: 上原 至雅
• 金额: $ 5.76万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03258241/
• 关键词: がん遺伝子; チロシンキナ-ゼ; ハ-ビマイシン; 抗生物質; スクリ-ニング

1.ハ-ビハイシン(HMA)のSrcチロシンキナ-ゼ上の結合部位の同定及びヒト扁平上皮がん細胞に対する作用HMAが結合するp60^<vーsrc>上の部位の同定を試みた。 ^<35>SーMet(または-Cys)標識したp60^<vーsrc>の免疫複合体をHMA処理してSDSーPAGEで解析すると、p60^<vーsrc>の移動度が対照に比べ高分子側にシフトすることが認められた。S.aureus V8プロテア-ゼによる限定分解および臭化シアン分解により移動度が変化する断片を解析した結果から、HMAが結合する部位はキナ-ゼ領域を含むC末端領域であるらしいことが分かった。HMAはEGF受容体が過剰発現しているヒト扁平上皮癌A431細胞の形態をフラットに変化させEGFに対する増殖のレスポンスも変化させた。この時、EGF受容体の自己燐酸化レベルが低下したが、これはHMA処理によりEGF受容体の生合成が途上の160KDaまでしか進行せず、その後急速に分解することが原因であった。2.がん遺伝子機能抑制物質の探索と新しい活性評価法、探索法の開発癌遺伝子srcまたはras等を組み込んだマウスやラットの細胞(NIH3T3,NRK)を用い、形態変化の他、新たに確立した増殖因子要求性の獲得を指標に探索を行なった。約2000株の放線菌、糸状菌培養ろ液について調べたところ、src,Kーras細胞共に形態をフラットに変化させるものが1株、増殖因子要求性を高めるものが1株得られた。それぞれ、既知抗生物質radicicolとbafilomycinsであることが判明した。NIH3T3/vーsrc細胞の低張バッファ-破砕液の遠心上清にホルボ-ルエステル、Ca^<2+>、cAMPなどの活性化剤を加え、γー^<32>PーATPと反応させ、リン酸化された蛋白をSDSーPAGEで解析することにより、Aキナ-ゼ、Cキナ-ゼ及びチロシンキナ-ゼ活性を同時に検出する方法を開発した。キナ-ゼ型のがん遺伝子機能抑制物質の活性評価、探索への応用が考えられた。

1. The identification of the binding site of HMA and the interaction between HMA and squamous epithelium cells. ^<35>S Met(-Cys) identification p60^&lt;v ^src&gt; immune complex HMA treatment SDS PAGE analysis, p60^&lt;v ^src&gt; mobility and contrast to polymer side. S.aureus V8- HMA receptor development in squamous cell carcinoma A431 cells This is the reason why the EGF receptor phosphorylation is low and rapid during HMA treatment. 2. Exploration of new inhibitors of gene function by activity evaluation method and exploratory method for development of gene src ras, etc. About 2000 strains of actinomycetes and actinomycetes were cultured in culture medium, and only 1 strain of Kras cells was obtained. It is known that antibiotics and bafilomycins are different. A <32>method was developed for simultaneous detection of the activities of A, C, and C in SDS PAGE analysis of hypotonicity, Ca, cAMP, ATP, and cAMP in NIH3T3/v src cells. The activity evaluation and exploration of the inhibitor of the function of the gene are discussed.

项目成果

Hidesuke Fukawawa: "Specific inhibitor of cytoplasmic protein tyrosine kinases by herbimycin A." Biochemical Pharmacology. 42. 1661-1671 (1991)

Hidesuke Fukawawa：“除草霉素 A 对细胞质蛋白酪氨酸激酶的特异性抑制剂。”

SuzukakeーTsuchiya Kayoko: "Inhibition of pynocytosis by hyghrolidin family antibiotis:possible correlation with their selective effects on oncogeneーexpressed cells." J. Antibiotics. 44. 344-348 (1991)

Suzukake-Tsuchiya Kayoko：“hyghrolidin 家族抗生素对细胞胞浆的抑制：可能与其对癌基因表达细胞的选择性作用相关。J. Antibiotics”。 44. 344-348 (1991)

Einspahr Kregg J: "Tyrosine phosphorylation provides an early and requisite signal for the activation of natural killer cell cytotoxic function." Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88. 6279-6283 (1991)

Einspahr Kregg J：“酪氨酸磷酸化为激活自然杀伤细胞的细胞毒功能提供了早期且必要的信号。”

上原 至雅: "オンコジ-ン作用の阻害に基づく抗癌剤の開発" バイオサイエンスとインダストリ-. 49. 45-48 (1991)

Shimasa Uehara：“基于抑制癌基因作用的抗癌药物的开发”《生物科学与工业》49. 45-48 (1991)。

Yuko Murakami: "Induction of hsp72/73 by herbimycin A,an inhibitor of transformation by tyrosine kinase oncogenes." Experimental Cell Research. 195. 338-344 (1991)

Yuko Murakami：“除草霉素 A 诱导 hsp72/73，除草霉素 A 是酪氨酸激酶癌基因转化的抑制剂。”