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線虫C.elegansチロシンキナ-ゼ遺伝子ファミリ-の細胞特異的発現と転写因子

线虫酪氨酸激酶基因家族的细胞特异性表达和转录因子

基本信息

批准号：
02258215
负责人：
大島靖美
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)Kinー7=letー23遺伝子の塩基配列に基いてプライマ-を合成し、PCR法によってmRNAの51未端側に相当する数種類のcDNA断片を得た。これらを結合して、cDNAのほぼ全塩基配列を決定した。2)これにより、kinー7は、1323アミノ酸からなる膜貫通型チロシンキナ-ゼをコ-ドすることが明らかとなった.このタンパク質の構造は哺乳類のEGF受容体と類似性が高い。3)これらの事実及びletー23変異株の性質より、kinー7/letー23の機能の一つとして、陰門前駆細胞上に存在し、anchor細胞からの陰門誘導シグナルの受容と伝達に働いているとの仮説が考えられる。この下流で恐らくletー60rasが機能している。4)この仮説をテストする一つの方法とし、Kinー7と大腸菌βガラクトシダ-ゼ(lacZ)との融合遺伝子を作成し、マ-カ-遺伝子(rolー6またはdpyー20)とともにC.elegansに導入した.このような個体につき、活性染色によりlacZの発現を調べている。幼虫においては、陰門前駆細胞、及び腹部神経索と思われる細胞、及び頭部、尾部のいくつかの細胞でのlacZの発現が観察され、上の仮説と矛盾しない。5)Kinー7の発現を解析するもう一つの方法として、lacZとの融合タンパクに対するウサギ抗血清から、Kinー7に対する特異抗体を精製している。6)Kinー7/lacZ融合豊伝子において、コ-ド領域の約2kb以遠の領域を欠失したものでは、頭部のいくつかの細胞で発現が見られなくなる.7)kinー8遺伝子をもつコスミドDNAの導入によって、letー240変異はrescueされないらしいことが示された。8)kinー8及びrolー6マ-カ-遺伝子を導入したN2株をEMS処理し、染色体上のKinー8遺伝子に変異を生じた子孫を探索している。いくつかの候補株が分離された。9)kinー8ゲノム遺伝子の塩基配列決定を行っている。

1)Kin-7=let-23 gene alignment base synthesis, PCR method to produce mRNA 51 terminal side of the corresponding several kinds of cDNA fragments. The sequence of cDNA sequences is determined by the combination of cDNA sequences. 2) The structure of this species is highly similar to that of mammalian EGF receptors. 3) The nature of the mutant, the function of kin-7/let-23, the existence of the cell in front of the vulva, the induction of the cell in front of the vulva by the anchor cell, and the acceptance of the cell. This is the 60ras function. 4) A method for preparing the fusion gene of E. coli β-lacZ (Kin-7) and C.elegans (rol-6). This is the case with individual, reactive staining, and the occurrence of lacZ. Larvae are divided into three groups: the first group of cells, the second group of cells, and the third group of cells. 5)Kin-7 protein analysis method, lacZ fusion protein analysis method, Kin-7 protein analysis method, lacZ fusion protein analysis method. 6)Kin-7/lacZ fusion gene is about 2kb long in the region, and the region is about 2kb long in the region, and the cell development in the head is about 2kb long in the region. 7)kin-8 gene is about 2kb long in the region, and the DNA introduction is about 2kb long in the region. 8)Kin-8 and Kin-6 are introduced into the N2 strain, and the Kin-8 gene on the chromosome is transformed into the offspring. The candidate plants are isolated. 9)kin-8