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線虫C.elegansチロシンキナ-ゼ遺伝子ファミリ-の細胞特異的発現と転写因子

线虫酪氨酸激酶基因家族的细胞特异性表达和转录因子

基本信息

批准号：
03254207
负责人：
大島靖美
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03254207/
关键词：
線虫C.elegans チロシンキナ-ゼ陰門形成キメラ解析プロモ-タ-

项目摘要

1)Kin7(=let-23)とlacZとの融合遺伝子の発現パタ-ンの解析を引続き行った。この融合遺伝子は、頭部、尾部の計30程度の細胞及び、腹部神経索に沿って並ぶ約12の細胞で発現することを昨年度観察した。この中にいくつかの陰門前駆細胞(VPC)が含まれると推定していた。細胞の同定を確実に行うため、XーgalによるlacZの活性染色のための個体試料の固定方法の改良を行った。その結果、融合遺伝子は、腹部において、神経索細胞では発現されているが、VPCで発現されていないことが明らかとなった。この結果は、本来のKinー7遺伝子もVPCで発現していないことを示唆する。2)更にこの点を明らかにするため、letー23遺伝子に陰門欠損変異をもつ(が致死でない)株に、野性型kinー7(=letー23)遺伝子とともに、マ-カ-としてhsp/lacZ融合遺伝子を染色体外にもつ形質転換体を作成し、陰門形成機能のキメラ解析を行った。その結果、陰門形成には、kinー7遺伝子のVPC(少なくともP5p,P6p,P7p)での発現は必要ないことがほぼ確実となった。3)kinー7遺伝子の上流にあるApal部位より上流を欠失したkinー7/lacZ融合遺伝子は、もとの融合遺伝子と異り、頭部先端に近いいくつかの細胞で発現が見られなくなることを確認した。更にいくつかの上流欠失変異を作成して、発現調節領域の同定を行っている。4)kinー7のC末端とlacZとの融合タンパクに対するウサギ抗体の精製はうまくいかなかった。現在kinー7のC末端等3ヶ所に対応する合成ペプチドを作成し、これらに対するウサギ抗体の作製を行っている。5)kinー8ゲノム遺伝子について、未定であった部分(N端側及び上流)約11kbの塩基配列をほぼ決定した。また、5'側のcDNAを単離し、全塩基配列を決定した。6)kinー8遺伝子のキナ-ゼ領域に、優性と予想される変異をin vitroで導入し、これを野性型の染色体外に導入したところ、unc表現型を示す個体がいくつか得られた。これがkinー8遺伝子の変異によるものであると確認している。

1) Kin7 (=let-23) The fusion gene was detected in about 30 cells in the head and tail and in about 12 cells in the abdomen. The VPC (Yin Gate Cell) in the middle of the heart contains the putative VPC. Improvement of fixation method of individual samples for cell identity determination The result is that the fusion gene, the abdomen, the nerve cord cell, the VPC, the brain, the brain, the brain. The result is that the original Kin-7 vector VPC appears in the middle of the display. 2)In addition, the gene of the wild type kin 7(=let-23) gene was analyzed by the gene of the fusion gene of the exachromosomal type and the gene of the pudendal type. As a result, the formation of the Yin Gate is negative, and the VPC(less than P5p, P6p, P7p) of the 7 descendants is necessary for the occurrence of the Yin Gate. 3)kin-7 7/lacZ In addition, it is necessary to make changes in the upper flow, and to realize the consistency of the regulatory field. 4) C-terminal of kin-7 and lacZ fusion protein were used to purify the antibody. Now the C-terminal of kin-7 and so on are the synthesis of the antibody. 5)Kin-8: The sequence of the gene is determined by the sequence of the gene (N-terminal and upstream), about 11kb. The 5'-side cDNA sequence is determined by DNA sequencing. 6)kin-8 gene is introduced in vitro, wild type is introduced in vitro, unc phenotype is expressed in individual. 8. The name of the person who is responsible for the crime is: