心筋細胞の圧受容体機構の解明とそれに続く細胞内情報伝達系の解析

心肌细胞压力感受器机制的阐明及细胞内信号转导系统的后续分析

基本信息

批准号：
06274208
负责人：
山崎力
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、心筋細胞に伸展負荷を加える独自の装置を用いて心筋細胞肥大に関与する細胞内情報伝達経路を解析し、これまでに、伸展負荷により、Cキナーゼ(PKC)、MAPキナーゼ(MAPK)の活性化がおこり、核内癌遺伝子発現の増強や、蛋白合成の亢進が引き起こされることを明らかにした。しかし、伸展負荷によるMAPKの活性化にいたる経路は未だ不明である。今回、MAPKの上流にあると考えられるリン酸化酵素を解析した。ラット新生仔培養心筋細胞に伸展負荷を加え、Raf-1キナーゼ(Raf-1)、MEKキナーゼ(MEKK)、MAPキナーゼキナーゼ(MAPKK)、MAPKの活性を解析した。これらの活性は、それぞれの特異抗体で免疫沈降後、特異的基質のリン酸化能を指標に検討した。すなわち、Raf-1、MEKKの活性をrecombinantMAPKKのリン酸化に伴う^<32>Pの取り込みを指標とし、同様にMAPKK活性の測定にはrMAPKを用いた。Raf-1とMEKKが、伸展負荷2分をピークに一過性に活性化し、MAPKK、MAPKがそれぞれ5分、8分をピークに活性化した。さらに、フォルボルエステル長期刺激またはStaurosporineによりPKCを抑制した後、伸展負荷を加えると、Raf-1、MAPKともに、その伸展負荷による活性化が約50〜70%抑制された。以上、伸展負荷により心筋細胞内においてプロテインキナーゼカスケードが活性化されることが明らかになった。Raf-1からMAPKに至るこの情報伝達経路は、一部PKCの活性化によって引き起こされるが、PKCを経由しない経路の存在も明らかになり、さらに、MAPKがRaf-1及び、MEKKの2重の支配下にあることも判明した。このことは、伸展負荷による心肥大形成の情報伝達の多様性、重要性を示していると考える。

我们使用将延伸载荷施加到心肌细胞中的独特装置分析了涉及心肌细胞肥大的细胞内信号传导途径，并揭示了扩展负荷导致C激酶（PKC）（PKC）和MAP激酶（MAPK）的激活，从而增强了核Oncogene Oncogene oncogene oncogens的表达和增强蛋白质的作用。但是，导致通过扩展负载激活MAPK的途径仍然未知。这次，我们分析了被认为是MAPK上游的磷酸烯酶。扩展负荷被用于大鼠新生儿培养的心肌细胞，并分析了RAF-1激酶（RAF-1），MEK激酶（MEKK），MAP激酶激酶（MAPKK）和MAPK的活性。使用每种特定抗体免疫沉淀后特定底物的磷酸化能力检查了这些活性。也就是说，RAF-1和MEKK的活性用于测量重组抗Mapkk磷酸化后 ^<32> p的摄取，同样，使用RMAPK来测量MAPKK活性。 RAF-1和MEKK在2分钟的延伸载荷的峰值下瞬时激活，而MAPKK和MAPK分别在5分钟和8分钟的峰值上激活。此外，在通过长期刺激或星形孢菌素抑制PKC后，施加了延伸载荷，RAF-1和MAPK的激活被抑制了约50-70％。已经揭示了蛋白激酶级联反应因延伸载荷而在心肌细胞中激活。从RAF-1到MAPK的这种信号通路部分是由PKC激活引起的，但也已经揭示了一种不会通过PKC的途径，并且MAPK在RAF-1和MEKK的双重控制下。这表明由延伸负荷引起的心脏肥大信息传播的多样性和重要性。