生合成反応における超分子形成の精密な解析と超天然酵素分子の創製

生物合成反应中超分子形成的精确分析和超自然酶分子的产生

• 批准号: 07229205
• 负责人: 斉藤 和季
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07229205/
• 关键词: 二次代謝; クローニング; ミノ酸生合成

【目的】スイカにおいて、システインと二次代謝性のβ-ピラゾールアラニンは一部共通の経路によって生合成される。セリンアセチル転移酵素によって生成する0-アセチルセリンはシステイン生合成系全体の正の調節物質と考えらており、本酵素の触媒的性質およびこの遺伝子の発現解析はシステインおよびβ-ピラゾールアラニン生合成系の統合的制御を理解する上で重要である。本研究では、セリンアセチル転移酵素遺伝子の発現制御機構を明らかにすることを目的とし、ゲノム遺伝子の単離と解析を行った。【方法・結果】スイカ黄化発芽体より調整したゲノムDNAをSau3AIで部分消化後、λEMBL3ベクターアームに連結し27万クローンからなるスイカゲノムDNAライブラリーを作製した。スイカのセリンアセチル転移酵素cDNA[1]をプローブとしてスクリーニングを行った結果、7個の陽性クローンが得られた。サザン分析によるこれらのクローンの解析をもとにセリンアセチル転移酵素をコードしている領域をサブクローニングし、塩基配列を決定した。その結果、スイカセリンアセチル転移酵素遺伝子は3個のエキソンと2個のイントロンで構成されていた。セリンアセチル転移酵素はシステイン生合成系の制御因子になっていると考えられるため、低硫酸イオン条件下で栽培したスイカから調製したRNAを用いてノーザン分析を行ったところ発現量に大きな変化はみられなかった。

【 objective 】 ス イ カ に お い て, シ ス テ イ ン と secondary metabolic の beta ピ ラ ゾ ー ル ア ラ ニ ン は a common の 経 road に よ っ て biosynthesis さ れ る. セ リ ン ア セ チ ル planning shift enzyme に よ っ て generated す る 0 - ア セ チ ル セ リ ン は シ ス テ イ ン raw GeChengXi all の is の regulation substances と exam え ら て お り, the properties of this enzyme の catalyst お よ び こ の posthumous son 伝 の 発 now parse は シ ス テ イ ン お よ び beta ピ ラ ゾ ー ル ア ラ ニ ン raw GeChengXi の suppression of integration of を understand す る で important で あ る. This study で は, セ リ ン ア セ チ ル heritage planning shift enzyme 伝 son の 発 system now royal institution を Ming ら か に す る こ と を purpose と し, ゲ ノ ム heritage 伝 son の 単 line from analytical を と っ た. Methods, results 】 【 ス イ カ etiolation 発 buds よ り adjustment し た ゲ ノ ム DNA を Sau3AI で part after digestion, lambda EMBL3 ベ ク タ ー ア ー ム に connect し 270000 ク ロ ー ン か ら な る ス イ カ ゲ ノ ム DNA ラ イ ブ ラ リ ー を cropping し た. ス イ カ の セ リ ン ア セ チ ル planning shift enzyme cDNA [1] を プ ロ ー ブ と し て ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た positive results, 7 の ク ロ ー ン が must ら れ た. サ ザ ン analysis に よ る こ れ ら の ク ロ ー ン の parsing を も と に セ リ ン ア セ チ ル planning shift enzyme を コ ー ド し て い る field を サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し, salt base with column を decided し た. そ の results, ス イ カ セ リ ン ア セ チ ル heritage planning shift enzyme 伝 son は three の エ キ ソ ン と 2 の イ ン ト ロ ン で constitute さ れ て い た. セ リ ン ア セ チ ル planning shift enzyme は シ ス テ イ ン raw GeChengXi の suppression factor に な っ て い る と exam え ら れ る た め, low acid イ オ ン で under the condition of cultivation し た ス イ カ か ら modulation し た RNA を with い て ノ ー ザ ン line analysis を っ た と こ ろ 発 quantities now に き な variations change は み ら れ な か っ た.