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アミノアシルtRNA合成酵素の構造解析を通してみる翻訳系の進化

通过氨酰-tRNA 合成酶的结构分析翻译系统的进化

基本信息

批准号：
07250221
负责人：
芝清隆
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトと大腸菌のアミノアシルtRNA合成酵素の間での一次構造の比較、また、両種間でのアミノアシルtRNA合成酵素によるtRNA分子の認識能力、tRNA分子上のアイデンティティー決定塩基の保存性などを比較検討することを通じ、tRNA分子が中心的役割を演じる翻訳系の進化について考察した。Cross-Species PCR法で得たヒトアミノアシルtRNA合成酵素遺伝子断片をプローブとして用い、対応するcDNAクローンをヒトcDNAライブラリーより選択した。既に他のグループから報告されているARS以外の11のcDNAを単離し、その全塩基配列を決定した。これでヒトの20種のアミノアシルtRNA合成酵素が全て単離されたことになる。また、細胞質型と同様のアプローチにより、いくつかのヒトのミトコンドリア型ARS遺伝子を単離している。イソロイシンとメチオニンの酵素に焦点を絞り、多量発現系を構築した。ヒトと大腸菌のリジルtRNA合成酵素によるtRNA分子認識機構を明らかにするために、大腸菌lysSlysUノックアウト株を用いた相補性試験を行った。その結果、ヒト遺伝子は上記大腸菌を相補することがわかった。ヒトと大腸菌のリジンtRNAの識別塩基(73位)は異なるが(GとA)、ヒトの酵素は、この識別塩基の違いを区別しないことが明らかとなった。一般的に、ARSの一次構造の保存性と、tRNA認識に関わる塩基の保存性の間に相関関係があると言えるようだ。最後に、細胞質型ミトコンドリア型イソロイシルtRNA合成酵素遺伝子のエクソン構造を決定しまた、イントロンの大きさも決定した。

Comparison of the primary structure of ヒトと coli tRNA synthetase tRNA synthesis enzyme, また, 両Inter-species tRNA synthesis enzyme tRNA synthesis enzyme tRNA molecule recognition ability, The structure of the tRNA molecule determines the storage properties of the base.とを通じ、The evolution of the tRNA molecule center and the evolution of the tRNA molecule are investigated. Cross-Species The PCR method was used to obtain the fragment of the tRNA synthesis enzyme from the たヒトアミノアシルtRNA synthesis enzyme.て用い、対応するcDNAクローンをヒトcDNAライブラリーより选択した. Both the 11 cDNA and the 11 cDNA other than ARS have been reported, and the whole base arrangement has been decided.これでヒトの20 kinds of のアミノアシルtRNA synthesis enzyme が全て単leave されたことになる. Cytoplasmic typeヒトのミトコンドリア type ARS legacy 伝子を単している.イソロイシンとメチオニンのzyme focus を twist り, a large amount of 発appearance system を construction した.ヒトと coli tRNA synthesis enzyme tRNA molecular recognition organization を明らかにするために, coliform lysSlysU ノックアウト strain を use いた complementary test 験を行った.そのRESULTS, ヒト伝子は上记 coliform bacteria することがわかった.ヒトと coli のリジンtRNA recognition base (position 73) はisoなるが(GとA) , ヒトのzyme は, このidentification base のviolation いをdifferentiation しないことが明らかとなった. General に, ARS の primary structure の conservation と, tRNA recognition に switch わ塩塩のののに correlation relationship があると言えるようだ. Finally, cytoplasmic mitrotron tRNA synthesis enzyme gene伝子のエクソンstructuralをdeterminationしまた、イントロンの大きさもdeterminationした.