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Nーmycタンパク質と特異的に結合するタンパク質類の解析

与 N-myc 蛋白特异性结合的蛋白分析

基本信息

批准号：
01015125
负责人：
田矢洋一
金额：
$ 2.56万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至 1990
项目状态：
已结题

项目摘要

Nーmycあるいは癌抑制遺伝子RBタンパク質と特異的に結合するタンパク質類の単離を目指していたが、RBタンパク質にはcdc2キナーゼでリン酸化されそうなアミノ酸配列の部位が10ケ所以上に存在するし、Nーmycタンパク質の中央部にはカゼイン・キナーゼIIでリン酸化されそうな領域が存在するので、これらの部位が本当にそれぞれのキナーゼでリン酸化されるか否かを先ず試してみた。cdc2キナーゼは細胞周期においてG_1期からS期への進行とG_2期からM期への進行の引き金を引く、大変に重要なリン酸化酵素である。実験の結果、RBタンパク質の少くとも8ケ所が、マウス乳癌細胞FM3Aから高度に精製したM期特異的cdc2キナーゼによってin vitroでリン酸化されることを見出した。さらに、G_1/S期特異的cdc2キナーゼによってはもっと強くリン酸化されることもわかった。G_1/S期特異的cdc2キナーゼはM期特異的cdc2キナーゼとは少し異ったアミノ酸配列の部位でRBタンパク質をリン酸化するのかも知れない。RBタンパク質には実際それらしき配列が多数存在する。この実験結果から推測されることは、RBタンパク質は他のタンパク質と特異的に結合して、本来、DNA複製や有系分裂を抑える働きをしているのではないか、そして、cdc2キナーゼでリン酸化されると他のタンパク質との解離が起こり、DNA複製や有系分裂の抑制が解除され細胞増殖の方に向かうのではないかということである。この仮説を証明するために、RBタンパク質と特異的に結合するタンパク質類の検出・同定を進めつつある。他方、Nーmycタンパク質の中央部がin vivoでもin vitroでもカゼイン・キナーゼIIでリン酸化されることも明らかにした。

Nーmycあるいはcancer suppressor RBタンパク性とspecific にcombination するタンパク性的の単利を目综合していたが, RBタンパク性にはcdc2キナーゼでリンacidified されそうなアミノacid preparation part が10ケ so onに EXISTENCE するし、Nーmycタンパクqualityのcentral part にはカゼイン・キナーゼII でリン acidified されそうな fieldがexistent するので、これらの区が本道にそれぞれのキナーゼでリン acidification されるか不かをFirst ずTRIED してみた. cdc2 cell cycle cell cycle G_1 phase S phase progress G_2 Period からM period への carry out の lead き金を lead く, large 変にimportant なリン acidifying enzyme である.実験のRESULTS, RBタンパクqualityの小くとも8ケ所が, MASK breast cancer cell FM3A highly refined したM phase specific cdc2キナーゼによってin In vitro acidification of acidification and acidification.さらに, G_1/S phase-specific cdc2 キナーゼによってはもっとstrong acidification されることもわかった. G_1/S phase-specific cdc2キナーゼはM phase-specific cdc2キナーゼとは小しThe part of the iso-ったアミノ acid combination is the でRBタンパクquality をリン acidification するのかも知れない. RB タンパク性には実记それらしき配arrayが多existentする.この実験RESULTSからguessされることは、RBタンパク性は他のタンパク性とspecific knot合して、original、DNA replication and division of the system , cdc2 キナーゼでリン acidification されるとhis のタンパクquality との dissociation がこり, DNA complex The method of inhibiting cell division and releasing it is the method of cell proliferation.この仮说をprovenするために, RBタンパク性とspecific にcombination するタンパクquality type の検出・同定を进めつつある. Other side, Nーmycタンパク性のcentral partがin vivoでもin vitroでもカゼイン・キナーゼIIでリンacidificationされることも明らかにした.