RBタンパク質の機能ドメインの解析

RB蛋白功能域分析

• 批准号: 02152130
• 负责人: 田矢 洋一
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02152130/
• 关键词: 癌抑制遺伝子; RBタンパク質; cdc2キナ-ゼ; リン酸化; 細胞周期

我々はRBタンパク質がM期特異的cdc2キナ-ゼによってin vitroでリン酸化されることを以前に示してきたが,in vivoではRBタンパク質のリン酸化はG_1/S期の境界線から始まりM期まで続く。そして,RBタンパク質による増殖抑制活性がこのリン酸化で解除されると推定される。そこで,G_1/S期特異的なものを含むすべてのRBキナ-ゼを検出することを試みた。その過程で,マウスFM3A細胞のcdc2キナ-ゼがMonoSカラムクロマトグラフィ-でG_1/SとG_2/M特異的な2つのピ-クに分かれ,RBキナ-ゼのピ-クはその2つの間に現れることを見出した。RBタンパク質上にはcdc2キナ-ゼの基質になるための共通配列をもつ部位が11ケ所に存在するが,それらの部位を含む合成ペプチドはすべてこのRBキナ-ゼのピ-ク分画でリン酸化された。さらに,このピ-クとほぼ重なる領域にサイクリンAが検出された。一方,RBタンパク質をリン酸化するキナ-ゼが抗RB抗体によってRBタンパク質と共沈殿されることも見出した。その活性は特にG_1/S期に強いこともわかった。以上の結果はG_1/S期にRBタンパク質をリン酸化する酵素がcdc2キナ-ゼであることを示唆しているけれども,in vivoとin vitroでリン酸化部位が一致するか否か,さらに,そのcdc2キナ-ゼに含まれているサイクリンの種類なども今後明らかにせねばならない。また,我々は,RBタンパク質のC末端から317個のアミノ酸をもつポリペプチドを大腸菌で発現させ,これを用いてRBタンパク質に対するモノクロ-ナル抗体を作製することにも成功した。これらの抗体はRBタンパク質の免疫沈降にも使えることがわかった。

I asked RB to check the cdc2 of the M phase, which is called in vitro, acidizing, acidizing, in vivo, RB, acidizing, phase 1, phase S, boundary line, phase M, phase II, phase II, phase M, phase II, phase M, phase II, phase II, In this study, RB was used to remove the presumptive effect of acidification. This is an example of the GL1

项目成果

Takehara,Nakada,S.,Hara,E.,<Taya,Y.>___ー,Sekiya,S.& Oda,K.: "Interaction of nuclear fractors with the regulatory region of the Nーmyc gene during differentiation of human embryonal carcinoma cells" Gene.

Takehara,Nakada,S.,Hara,E.,<Taya,Y.>___ー,Sekiya,S.& Oda,K.：“细胞分化过程中核因子与 Nーmyc 基因调控区的相互作用人胚胎癌细胞”基因。

Tamai,K.,Saitoh,S.,Kobayashi,A.,Nishimura,S.& <Taya,Y.>___ー: "Monoclonal antibodies against the human retinoblastoma gene protein"

Tamai, K.、Saitoh, S.、Kobayashi, A.、Nishimura, S. 和 <Taya, Y.>___ー：“针对人视网膜母细胞瘤基因蛋白的单克隆抗体”

<Taya,Y.>___ー,Yasuda,H.,Kamijo,M.,Nakaya,K.,Nakamura,Y.,Ohba,Y.& <Nishimura,S.>___ー: "Phosphorylation of the tumor suppressor gene RB protein by Mーphase specific histone H1 kinase" Genetic basis for carcinogenesis:Tumor suppressor genes and oncogenes(Knud

<Taya, Y.>___ー、Yasuda, H.、Kamijo, M.、Nakaya, K.、Nakamura, Y.、Ohba, Y. & <Nishimura, S.>___ー：“肿瘤的磷酸化M期特异性组蛋白H1激酶抑制基因RB蛋白”致癌的遗传基础：抑癌基因和癌基因(Knud

Kitagawa,M.,Saitoh,S.,Okuyama,A.,Tamai,K.,Ohba,Y.,Yasuda,H.,<Nishimura,S.>___ー& <Taya,Y.>___ー: "The retinoblastoma gene protein is associated with cdc2 kinase"

北川，M.，齐藤，S.，奥山，A.，玉井，K.，大场，Y.，安田，H.，<西村，S.>____& <Taya, Y.>____： “视网膜母细胞瘤基因蛋白与 CDC2 激酶相关”

<Taya,Y.>___ー,Kitagawa,M.,Saitoh,S.,Okuyama,A.,Tamai,K.,Kamijo,M.,Ohba,Y.,Yasuda,H.& <Nishimura,S.>___ー: "Protein kinases for cell cycleーdependent phosphorylation of the retinoblastoma gene protein"

<Taya, Y.>___、北川 M.、斋藤 S.、奥山 A.、玉井 K.、上条 M.、大场 Y.、安田 H. 和 <西村 S.>__ _ー：“视网膜母细胞瘤基因蛋白细胞周期依赖性磷酸化的蛋白激酶”