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酵母人工染色体を介した、癌抑制遺伝子の移入による肝細胞癌培養系の構築と機能解析

酵母人工染色体转抑癌基因肝癌培养体系的构建及功能分析

基本信息

批准号：
07273276
负责人：
村上善則
金额：
$ 1.54万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.200-1,700キロ塩基対の挿入DNA断片をもつ酵母人工染色体(YAC)を、スフェロプラスト融合法を用いて、ヒト並びにマウス培養細胞に安定して導入する技術を確立した。2.長大な挿入DNA断片をもつYACクローンの導入においては、通常、遺伝子のみならず、その発現制御領域も導入されること、また多くの場合1コピーのみ導入されることから、導入遺伝子の、生理的状態に近い発現が得られるため、既知の遺伝子の機能解析に有用な手段となる。そこで正常p53遺伝子を各々0、1、2コピー保持する肝細胞癌培養系を構築し、その機能を解析することを目的とし、予備実験として、まずp53遺伝子を含むYACクローンをマウスL細胞に導入して発現させ、その生物学的性質の変化を検討した。この結果、p53遺伝子が導入、発現した細胞では細胞飽和密度が低下することが明らかになった。3.YACクローンの細胞への導入法を用いれば、腫瘍DNAにおけるヘテロ接合性の解析により特定された数cMの染色体領域から、その機能を指標としてがん抑制遺伝子を単離することも可能である。そこで、ヒト肺非小細胞癌において共通して欠失の認められる第11染色体q21-23の約3センチモルガンの領域に対応する3つのYACクローンを、ヒト並びにマウス肺非小細胞癌細胞A549,LLCに導入した。この結果、A549細胞、LLC細胞ともにYACクローンの一つy939の全長に近いDNA領域が導入された細胞では腫瘍原性が抑制されたが、このYACクローンの一部や他のYACクローンが導入された細胞では腫瘍原性は抑制されず、y939上に癌抑制遺伝子が存在することが示唆された。

1.200-1,700 DNA fragments were inserted into yeast artificial chromosomes (YAC). The technology of stable introduction of yeast artificial chromosomes (YAC) into cultured cells was established. 2. The introduction of DNA fragments into the genome is usually carried out in the field of gene expression control. In many cases, the introduction of DNA fragments into the genome is carried out in the physiological state. The functional analysis of known DNA fragments is useful. To investigate the development and biological properties of the normal p53 gene, including its introduction into human hepatocellular carcinoma cells, in vitro and in vivo. As a result, p53 gene was introduced and expressed in cells, and cell saturation density was reduced. 3. YAC gene introduction method is used to analyze the zygosity of tumor DNA, to analyze the chromosome domain of specific gene, to analyze the function of gene, and to inhibit the gene separation. In addition, the common deletion of chromosome 11, q21-23, was introduced into lung non-small cell carcinoma A549,LLC. The results showed that A549 cells, LLC cells and YAC cells were introduced into a full-length DNA domain near y939, and some YAC cells were introduced into cells with tumorigenic inhibition, and some YAC cells were introduced into cells with tumorigenic inhibition.