癌細胞の生物学的特性に基づいた検定法による肺非小細胞癌抑制遺伝子単離に関する研究

基于癌细胞生物学特性的检测方法分离肺癌非小细胞抑癌基因的研究

• 批准号: 08265267
• 负责人: 村上 善則
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265267/
• 关键词: 肺非小細胞がん; がん抑制遺伝子; 第11染色体長腕; 酵母人工染色体; スフェロプラスト融合法

ヒト肺非小細胞がんにおいては、第11染色体長腕q21-q23領域のヘテロ接合性の消失(LOH)が高頻度に認められ、がん抑制遺伝子の存在が示唆されるが、この染色体領域の異常に起因すると考えられる遺伝性肺がんは知られていない。そこで、このがん抑制遺伝子を、機能的検定法により単離することをプロジェクトの最終の目的として、まず、当該領域に存在する3種類の酵母人工染色体(YAC)クローンを、ヒト、並びにマウス肺非小細胞がん細胞A549,LLCにスフェロプラスト融合法により導入した。この結果、1つのYACにクローン化された約1.5メガ塩基対の断片の全長が移入された肺がん細胞では、ヌードマウス皮下における腫瘍原性の著名な抑制が認められたが、このYACの一部分の断片や、他の2つのYACの全長が移入された肺がん細胞は、親細胞であるA549やLLCと同様、強い腫瘍原性を示した。このことから、当該YACにクローン化された約1.5メガ塩基対の断片内に腫瘍原性を抑制する活性が存在することが示された。また、79例の肺がんDNAを用いた解析からも、この領域がLOHを示す最小共通領域であることが明らかになった。そこで、肺がん抑制遺伝子の座位をさらに限定化する目的で、当該YACクローンを、酵母内遺伝子相同組換えによって順次断片化し、200,500,800,1,0000,1,100キロ塩基対の断片を含むYACクローンを得た。さらに、この断片化YACをA549細胞に導入して、それぞれ複数の移入肺がん細胞を得た。これらの移入肺がん細胞腫瘍原性を検討することにより、遺伝子の座位を200-400キロ塩基対の領域内に限定することが可能と考えられる。

The loss of zygosity (LOH) in the region of chromosome 11 long wrist q21-q23 is highly frequent in lung non-small cells. The final objective of this method is to identify the gene expression and function of yeast artificial chromosome (YAC). When there are three kinds of YAC in this field, the fusion method is introduced into lung non-small cell A549, LLC. The results showed that 1. YAC fragment length was about 1.5 times longer than that of A549 LLC fragment length, and 2. YAC fragment length was about 1.5 times longer than that of A549 LLC fragment length. The results showed that the activity of tumor initiation inhibition existed when the YAC gene was transformed to about 1.5 μ g/mL. 79 cases of lung DNA analysis, the domain of LOH, the smallest common domain For the purpose of restricting the seats of lung-inhibiting genes, when the same components of the YAC genes and yeast genes were replaced, the YAC genes were sequentially fragmented, including 200,500,800,1,0000,1,100 square meters. In addition, the fragment of YAC was introduced into A549 cells, and a plurality of transplanted lung cells were obtained. The gene locus of the transplanted lung cancer is 200 - 400 bp, and the gene locus is 200 - 400 bp.

项目成果

Sonoda,Y.,Murakami,Y.,Tominaga,T.Kayama,T.,Yoshimoto,T.& Sekiya,T.: "Deletion mapping of chromosome 10 in human glioma." Jpn.J.of Cancer Res.87(4). 363-367 (1996)

园田Y.、村上Y.、富永T.加山T.、吉本T.

Murakami,Y.: "DNA alterations in human pancreatic cancers." J.Hep.Bil.Pancr.Surg.(in press).

Murakami,Y.：“人类胰腺癌中的 DNA 改变。”

Okano,A.,Murakami,Y.and Sekiya,T.: "Detection of mRNA aberrations of human hepatocellular carcinoma (HCC) cell line using RNA-arbitrarily primed (AP)-PCR-SSCP analysis." J.Tokyo Wom.Med.Coll.66(9). 729-735 (1996)

Okano,A.、Murakami,Y. 和 Sekiya,T.：“使用 RNA 任意引物 (AP)-PCR-SSCP 分析检测人肝细胞癌 (HCC) 细胞系的 mRNA 畸变。”

Tamura,K.,Zhang,X.,Murakami,Y.,Hirohashi,S.,Xu,H-J.,Hu,S-X.,Benedict,W.F.& Sekiya,T.: "Deletion of three distinct regions on chromosome 13q in human non-small cell lung cancer." lnt.J.Cancer. (in press).

田村K.，张X.，村上Y.，广桥S.，徐H-J.，胡S-X.，本尼迪克特，W.F.

Murakami,Y.,Albertsen,H.,Brothman,A.R.,Leach,R.J.& White,R.L.: "Suppression of the malignant phenotype in a human prostate cancer cell line PPC-1 by introduction of normal fragments of human chromosom 10" Cancer Res.56(15). 2157-2160 (1996)

村上，Y.，阿尔伯特森，H.，布罗斯曼，A.R.，利奇，R.J.