マウス精母細胞におけるプロテインホスファターゼ2Cの特異的発現の意義

小鼠精母细胞中蛋白磷酸酶2C特异性表达的意义

• 批准号: 08275204
• 负责人: 田村 眞理
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08275204/
• 关键词: プロテインホスファターゼ; 発現制御; 精子形成; プロモーター; 脱リン酸カスケード; 細胞内局在

我々はこれまでに、PP2Cには6種類のアイソフォーム(α, β-1, β-2, β-3, β-4およびβ-5)が存在することを明らかにした。これからのうちαとβは異なった遺伝子産物であり、βの5種類のアイソフォームは単一のpre-mRNAからの選択的スプライシングの産物である。また,これまでの研究の結果,マウス精巣の第1減数分裂パキテン期の精母細胞において、PP2Cβ-3, -4および-5の発現が著しく上昇することが明らかになった。そこで、今回、精母細胞におけるPP2Cβ遺伝子の発現制御機構の解明を目的に、PP2CβゲノムDNAのクローンングと構造解析およびRT-PCRを用いた転写産物の解析を行った。その結果、翻訳開始点を含むエクソン(IV)の上流に3つのエクソン(I, II, III,)が存在し、新生児マウス精巣(精巣細胞のみを含む)ではIIVを含む転写産物のみが検出されたのに対し、成獣マウス精巣の転写産物では、II, III, IVエクソンの読みとりが行われた。さらに、Iエクソンの上流には構成的発現に関与すると考えられるプロモーター活性が検出された。以上の結果から、IIエクソンの上流に精巣特異的発現に関わるプロモーターが存在することが示唆され、現在その解析を進めている。PP2Cの6種類のアイソフォームの機能の解析を目的に、HAタッグをPP2CのN末端に付加したキメラタンパク質のCOS7細胞での発現システムを確立した。抗HA抗体による免疫染色により、発現されたPP2Cの細胞内局在を調べたところ、いずれのアイソフォームも、主に細胞核い局在することが判明した。また、6種類のアイソフォームのうちPP2Cαのみが細胞内でリン酸化され、その部位がC末端領域のセリン残基であること、および、PP2Cαのリン酸化レベルが、培養中に添加したオカダ酸によって2倍に上昇することが明らかになった。以上のことから、PP2Cαを介する新規の脱リン酸カスケードの存在が示唆された。

I 々 は こ れ ま で に, PP2C に は 6 kinds の ア イ ソ フ ォ ー ム (alpha, beta 1, beta 2, beta 3, beta 4 お よ び beta 5) exist が す る こ と を Ming ら か に し た. こ れ か ら の う ち alpha と beta は different な っ た heritage 伝 zi chan content で あ り, beta 5 kinds の の ア イ ソ フ ォ ー ム は 単 a の pre - mRNA か ら の sentaku of ス プ ラ イ シ ン グ の product で あ る. ま た, こ れ ま で の の research results, マ ウ ス fine 巣 の 1 meiosis パ キ テ ン period の spermatocyte に お い て, PP2C beta 3, 4 お よ び - 5 の 発 が now the し く rise す る こ と が Ming ら か に な っ た. そ こ で, today back, spermatocyte に お け る PP2C beta heritage 伝 son の 発 system royal institution の now interpret に を purpose, PP2C beta ゲ ノ ム DNA の ク ロ ー ン ン グ と structure お よ び rt-pcr を with い た planning to write a product line analytical を の っ た. そ の results, 訳 start point を む エ ク ソ ン (IV) の high-class に 3 つ の エ ク ソ ン (I, II, III,) が し, where new マ ウ ス fine 巣 (pure 巣 の み を む) で は IIV を containing む product planning write の み が 検 out さ れ た の に し, seaborne into 獣 マ ウ ス fine 巣 の product planning write で は, II, III, IVエ ソ ソ 読みと 読みと が が lines われた. さ ら に, I エ ク ソ ン の upper に は 発 now に consisting of masato and す る と exam え ら れ る プ ロ モ ー タ ー active が 検 out さ れ た. の above results か ら, II エ ク ソ ン の high-class に fine 巣 specific 発 now に masato わ る プ ロ モ ー タ ー が exist す る こ と が in stopping さ れ, now そ の parsing を into め て い る. PP2C の 6 kinds の ア イ ソ フ ォ ー ム の function analytical を の purpose に, HA タ ッ グ を PP2C の N terminal に plus し た キ メ ラ タ ン パ ク qualitative の COS7 cell で の 発 now シ ス テ ム を establish し た. Anti HA antibody に よ る immune dyeing に よ り, 発 now さ れ た PP2C の cells inside bureau in を adjustable べ た と こ ろ, い ず れ の ア イ ソ フ ォ ー ム も, main に nucleus い bureau in す る こ と が.at し た. ま た, 6 species の ア イ ソ フ ォ ー ム の う ち PP2C alpha の み が intracellular で リ ン acidification さ れ, そ の parts が C terminal areas の セ リ ン residues で あ る こ と, お よ び, PP2C alpha の リ ン acidification レ ベ ル が, cultivating に added し た オ カ ダ acid に よ っ て 2 times に rise す る こ と が Ming ら か に な っ た. Above の こ と か ら, PP2C alpha を dielectric す る new rules の off リ ン acid カ ス ケ ー ド の is が in stopping さ れ た.

项目成果

Takayasu Kobayshi: "Enhanced UV sensitivity of yeast cells induced by over expression of Mg^<2+>-dependent protein phoshatase α(type 2Cα)." Mutation Res.32. 213-217 (1996)

Takayasu Kobayshi：“Mg^2+依赖性蛋白磷酸酶α（2Cα型）的过度表达诱导酵母细胞的紫外线敏感性增强。” 213-217（1996）。

Takayasu Kobayashi: "Methods in Molecular Biology" Humana Press (in press), (1997)

小林贵康：“分子生物学方法”Humana Press（印刷中），（1997）

Yoji Sasahara: "Okadaic acid suppresses neural differentiation-dependent expression of the neurofila-ment-Lgene in P19 embryonal carcinoma cells by posttranscriptional modification." J.Biol.Chem.271. 25950-25957 (1996)

Yoji Sasahara：“冈田酸通过转录后修饰抑制 P19 胚胎癌细胞中神经丝 L 基因的神经分化依赖性表达。”

Noriko Yokoyama: "Purification and characterization of protein phosphatase 2C in rat parotid acinar cells : two forms of Mg^<2+>-activated histone phosphatase and phosphorylation by cAMP-dependent protein kinase." Arch. Biochem. Biophys.331. 1-8 (1996)

Noriko Yokoyama：“大鼠腮腺腺泡细胞中蛋白磷酸酶 2C 的纯化和表征：Mg^2 激活的组蛋白磷酸酶的两种形式以及 cAMP 依赖性蛋白激酶的磷酸化。”

Shunsuke Kato: "Differentiation-dependent enhanced expression of protein phospatase 2Cβ in germ cells of mouse seminiferous tubules." FEBS Lett.396. 293-297 (1996)

Shunsuke Kato：“小鼠生精小管生殖细胞中蛋白磷酸酶 2Cβ 的分化依赖性增强表达。”FEBS Lett.393-297 (1996)。