PP2CによるSAPKシグナル伝達路の制御機構

PP2C对SAPK信号通路的控制机制

• 批准号: 13216008
• 负责人: 田村 眞理
• 金额: $ 4.42万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216008/
• 关键词: SAPK; シグナル伝達路; IL-1; TAK1; PP2C

目的SAPKシグナル伝達路は細胞の分化、アポトーシスやストレス応答に関わる主要なシグナル伝達路である。SAPKシステムは少なくとも3段階の連続したプロテインキナーゼ反応により構成されるが、それぞれのステップにおいて、プロテインホスファターゼによる負の制御を受ける事により、システム全体としての精緻な調節が行われると考えられる。本研究ではSAPKシグナル伝達路のプロテインホスファターゼによる制御機構を解明することを目的とする。具体的には、プロテインホスファターゼ2Cβ(PP2Cβ)欠損ES細胞を用いた解析により、PP2CβのSAPKシステムの制御因子としての生理的意義を明らかにすることを目的とする。さらに、最近我々がクローニングに成功した3つの新規のPP2CファミリーメンバーがSAPKシステムの制御に関わる可能性について検討する。結果PP2Cβ欠損ES細胞を用いた解析SAPRKシグナル伝達路におけるPP2Cβの生理的意義を詳細に解析する目的で、PP2Cβ遺伝子を破壊したES細胞を作製した。ES細胞の野生株とPP2Cβ(-/-)株にアニソマイシンやUVによるストレスを負荷し、内因性のMKK4のリン酸化レベルを比較したところ、いずれのストレス刺激の場合もPP2Cβ(-/-)株のMKK4のリン酸化レベルは野生株に比べて亢進していた。ES細胞の解析と並行させて、PP2Cβ遺伝子ノックアウトマウスの作製も進めてきたが、これまでにgerm line transmissionが確認された。新規PP2C遺伝子のクローニングと解析ESTクローニングにより3種類の新規のPP2Cファミリーメンバー(ε,ζ,η)をコードするcDNAを単利した。これらのクローンのORFはいずれもPP2Cファミリー特有のモチーフを有しており、大腸菌で発現させたリコンビナントタンパク質はいずれもMg^<2+>/Mn^<2+>依存性でオカダ酸抵抗性のホスファターゼ活性を示した。293細胞における発現システムを用いて、IL-1依存性のSAPKシステムの活性に対するPP2Cε,ζ,ηの影響を調べたところ、ηにおいてPP2Cβと同様の抑制効果を観察した。

Purpose SAPK シ グ ナ ル 伝 の way は cell differentiation, ア ポ ト ー シ ス や ス ト レ ス 応 answer に masato わ る main な シ グ ナ ル 伝 journey で あ る. Less SAPK シ ス テ ム は な く と も three period of stage の even 続 し た プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ anti 応 に よ り constitute さ れ る が, そ れ ぞ れ の ス テ ッ プ に お い て, プ ロ テ イ ン ホ ス フ ァ タ ー ゼ に よ る negative の suppression を by け る matter に よ り, シ ス テ ム all と し て の delicate な line adjustment が わ れ る と exam え ら れ る. This study で は SAPK シ グ ナ ル 伝 journey の プ ロ テ イ ン ホ ス フ ァ タ ー ゼ に よ る system of the royal institution を interpret す る こ と を purpose と す る. Specific に は, プ ロ テ イ ン ホ ス フ ァ タ ー ゼ beta 2 c (PP2C beta) owe loss ES cells を using い た parsing に よ り, PP2C beta の SAPK シ ス テ ム の suppression factor と し て の physiological significance を Ming ら か に す る こ と を purpose と す る. さ ら に, recently I 々 が ク ロ ー ニ ン グ に successful し た 3 つ の new rules の PP2C フ ァ ミ リ ー メ ン バ ー が SAPK シ ス テ ム の suppression に masato わ る possibility に つ い て beg す 検 る. Results PP2C beta owes loss ES cells を い た parsing SAPRK シ グ ナ ル 伝 journey に お け る PP2C beta の physiological significance of detailed analytical す に を る purpose で, PP2C beta but 伝 を broken 壊 し た ES cells を cropping し た. ES cells の wild strains と PP2C beta (- / -) strains に ア ニ ソ マ イ シ ン や UV に よ る ス ト レ ス を load し, endogenous の MKK4 の リ ン acidification レ ベ ル を compare し た と こ ろ, い ず れ の ス ト レ ス stimulus の occasions も PP2C beta (- / -) strains の MKK4 の リ ン acidification レ ベ ル は wild strains に than べ て hyperthyroidism し て い た . ES cells の parsing と parallel さ せ て, PP2C beta but 伝 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス も into the の cropping め て き た が, こ れ ま で に germ line transmission が confirm さ れ た. New rules PP2C heritage 伝 son の ク ロ ー ニ ン グ と parsing EST ク ロ ー ニ ン グ に よ り 3 kinds の new rules の PP2C フ ァ ミ リ ー メ ン バ ー (epsilon, zeta, eta) を コ ー ド す る cDNA を 単 Leon し た. こ れ ら の ク ロ ー ン の ORF は い ず れ も PP2C フ ァ ミ リ ー の unique モ チ ー フ を have し て お り, coliform で 発 now さ せ た リ コ ン ビ ナ ン ト タ ン パ ク qualitative は い ず れ も Mg ^ 2 + < > / Mn ^ 2 + < > dependency で オ カ ダ acid resistance の ホ ス フ ァ タ ー を ゼ activity in し た. 293 cells に お け る 発 now シ ス テ ム を with い て dependency, IL - 1 の SAPK シ ス テ ム の active に す seaborne る PP2C epsilon, zeta, eta の influence を adjustable べ た と こ ろ, eta に お い て PP2C beta と with others の inhibition of unseen fruit を 観 examine し た.

项目成果

Hanada, M.: "Regulation of the TAK1 signaling pathway by protein phosphatase 2C"J. Biol. Chem.. 276. 5753-5759 (2001)

Hanada, M.：“蛋白磷酸酶 2C 对 TAK1 信号通路的调节”J。

Tamura, S.: "Regulation of stress-activated protein kinase signaling pathways by protein phosphatases"Eur. J. Biochem. mini-review series. (in press).

Tamura, S.：“通过蛋白磷酸酶调节应激激活蛋白激酶信号传导途径”Eur。

Higuchi, T.: "Effects of ATP on regulation of galactosyltransferase-I activity responsible for synthesis of the linkage region between the core protein and glycosaminoglycan chains of proteoglycans"Biochem. Cell Biol.. 79. 159-164 (2001)

Higuchi, T.：“ATP 对半乳糖基转移酶 I 活性调节的影响，半乳糖基转移酶 I 活性负责合成蛋白聚糖的核心蛋白和糖胺聚糖链之间的连接区域”Biochem。

Wang H.: "Activation of c-Jun amino-terminal kinase is required for retinoic acid-induced neural differentiation of P19 embryonal carcinoma cells."FEBS Lett.. 503. 91-96 (2001)

Wang H.：“视黄酸诱导 P19 胚胎癌细胞的神经分化需要激活 c-Jun 氨基末端激酶。”FEBS Lett.. 503. 91-96 (2001)