骨格筋細胞の分化におけるタンパク質ホスファターゼの機能

蛋白磷酸酶在骨骼肌细胞分化中的作用

• 批准号: 04152011
• 负责人: 田村 眞理
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152011/
• 关键词: プロテインホスファターゼ; cDNAクローニング; タンパク質リン酸化

1.タイプ2C_βプロテインホスファターゼcDNAのクローニング。今回我々は、タイプ2Cプロテインホスファターゼ(PP2C)の2つのサブタイプ(2C_αおよび2C_β)のうち、2C_βの全長をコードするマウスcDNAクローン(pTK-1)を単離した、pTK-1は390個のアミノ酸より成るタンパク質をコードしており、活性なタンパク質の大腸菌での発現にも成功した。またノーザン解折の結果、pTK-1とハイブリダイズする2種類のmPNA(3.5kbおよび3.0kb)がマウスの各種臓器に普通的に観察されたが、比較的、脳、心臓および骨格筋で発現量が多かった。またP19細胞がレチノイン酸処理によって神経細胞に分化する過程で、特に、3.5kbのmRNAの量の増加が観察された。骨格筋の分化過程における、これらのmRNAの量的変動の有無については現在検討中である。2.タイプ2C_αプロテインホスファターゼのリン酸化。酵母細胞をPP2C_αの発現ベクターでトランスフォームし、 ^<32>Piでインオンベートしたところ、発現されたPP2C_αのセリン残基のリン酸化が観察された。一方精製したPP2C_αをカゼインキナーゼIIでリン酸化させたところ、PP2C_α1モルあたり1.5モルのリン酸を取り込みが観察された。リン酸化アミノ酸はセリンであった。さらにリン酸化ペプチドマッピングにより、in vivoおよびin vivitroでのリン酸化部位は同一であることが強く示唆された。以上の結果から、PP2C_αは酵母細胞内でカゼインキナーゼIIによりリン酸化された可能性が示唆された。PP2C_αのリン酸化の生理的意味については現在検討中である。

1。2C_β蛋白磷酸酶cDNA的克隆。在这里，我们分离了一个小鼠cDNA克隆（PTK-1），该克隆（PTK-1）编码了2C型蛋白质磷酸酶（PP2C）（2C_α和2C_β）的两个亚型中的2C_β的全长。 PTK-1编码由390个氨基酸组成的蛋白质，并且在大肠杆菌中也成功表达活性蛋白。此外，由于北部碎片块，通常在小鼠的各种器官中观察到两种与PTK-1杂交的MPNA（3.5 kb和3.0 kb），但在大脑，心脏和骨骼肌中相对较高。此外，观察到3.5 kb的mRNA量增加，尤其是在通过视黄酸治疗区分为神经元的p19细胞过程中。目前正在研究骨骼肌分化过程中这些mRNA中这些mRNA的存在或不存在。 2。2C_α蛋白磷酸酶的磷酸化。当酵母细胞用PP2C_α的表达载体转化并用 ^<32> Pi iNOMB时，观察到表达PP2C_α的丝氨酸残基的磷酸化。另一方面，当用酪蛋白激酶II磷酸化纯化的PP2C_α时，观察到1.5摩尔的磷酸盐被掺入PP2C_α的每摩尔。磷酸化的氨基酸是丝氨酸。此外，磷酸化的肽映射强烈建议体内和体内的磷酸化位点相同。以上结果表明，酵母细胞中酪蛋白激酶II磷酸化可能已被PP2C_α磷酸化。 PP2C_α磷酸化的生理意义目前正在研究中。

项目成果

Toru Yamasaki: "Characterization of mucin in the hepatic bile of patients with intrahepatic pigment stones" J.Gastroenterol.Hepatol.7. 36-41 (1992)

Toru Yamasaki：“肝内色素结石患者肝胆汁中粘蛋白的特征”J.Gastroenterol.Hepatol.7。

Takayasu Kobayashi: "Expression of rat type 2ca protein phosphatase in Saccharomyces cerevisiae cells" Adv.Prat.Phosphatases.

Takayasu Kobayashi：“酿酒酵母细胞中大鼠 2ca 型蛋白磷酸酶的表达”Adv.Prat.磷酸酶。

Susumu Ohishi: "Enhanced exression of type 2C protein phosphatase gene durinh myogenic differentiotin of C3H10T1/2 cells" Biochem.Internatl.28. 345-351 (1992)

Susumu Ohishi：“C3H10T1/2 细胞生肌分化过程中 2C 型蛋白磷酸酶基因的表达增强”Biochem.Internatl.28。